【正文】 第五章 中藥制劑中各類化學成分分析 藥物分析學科 ?掌握中藥制劑中生物堿、黃酮、三萜皂苷、醌類成分的定性、定量原理與方法。 ?熟悉中藥制劑中揮發(fā)性成分、木質(zhì)素類成分的定性、定量原理與方法。 ?了解其他成分（有機酸類、環(huán)烯醚萜類、香豆素類、單萜及二萜類、多糖類）的分析方法。 【 目的要求 】 藥物分析學科 第五章 中藥制劑中各類化學成分分析 學習方法 結構 性質(zhì) 分析方法 ? 結構：母核、官能團、分子量等 ? 物理化學性質(zhì)：溶解性、酸堿性、揮發(fā)性、氧化還原性、 旋光性、光譜特性等 ? 分析方法： 總類成分：化學分析法、分光光度法 單一成分：各種色譜法（ GC、 HPLC、 HPCE、 TLCS、 SFC等） 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 一、概述 概念：生物堿是生物界除生物體必需的含氮化合物（如 氨基酸、蛋白質(zhì)和 B族維生素等）之外的所有含氮有機化合 物，因其結構中氮原子上的未共享電子對而大多具有 堿性 。 含生物堿成分的常用中藥： 中藥名稱 主要生物堿成分 中藥名稱 主要生物堿成分 山豆根 制川烏 馬錢子 延胡索 苦參堿、氧化苦參堿、 槐果堿、金雀花堿 烏頭堿 、 次烏頭堿、 新烏頭堿 馬錢子堿、番木鱉堿 （士的寧）、 偽馬錢子 堿、偽番木鱉堿 延胡索乙素、延胡索甲 素、 原阿片堿、黃連堿 苦 參 麻 黃 黃 連 黃 柏 防 己 苦參堿、 槐定堿、槐果堿、氧化苦參堿 麻黃堿、偽麻黃堿、 去甲麻 黃堿、甲基麻黃堿 小檗堿、 巴馬丁、藥根堿、 黃連堿 小檗堿、藥根堿、 木蘭花堿 粉防己堿、 防己諾林堿、輪 環(huán)藤酚堿、木蘭堿 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 二、理化性質(zhì) 溶解性 大多數(shù)生物堿難溶于水，易溶于 氯仿 、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有機溶劑； 與酸結合成鹽后水溶性增加，但酸不同，生成的鹽水溶性有差異； 季銨型生物堿、有氮氧配位鍵的生物堿易溶于水 液體生物堿及一些小分子固體生物堿則既溶于水也可溶于有機溶劑； 含有酸性官能團或酯鍵的生物堿還可溶于一些堿液或熱苛性堿液。 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 二、理化性質(zhì) 沉淀反應 ? 大多數(shù)生物堿在酸性水溶液中可以與某些試劑生成不溶于水的復鹽或分子復合物。 ? 生物堿沉淀劑：碘化物復鹽、重金屬鹽、大分子有機酸 馬錢子散中生物堿成分的鑒別 取馬錢子散 1g，加濃氨試液數(shù)滴及氯仿 10ml，浸泡數(shù)小時， 濾過，取濾液 1ml蒸干，殘渣加稀鹽酸 1ml使溶解，加碘化鉍 鉀試液 1~2滴，即生成黃棕色沉淀。 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 二、理化性質(zhì) 顯色反應 ? 生物堿在一定 pH條件下可與一些 酸性染料 （多為磺酸肽類）生成有色絡合物，可被 氯仿 等有機溶劑定量提出 ? 結構中具有酯鍵的酯堿如烏頭堿等可與 異羥肟酸鐵試劑 反應產(chǎn)生 紫紅色 ； 這些特點可用于中藥制劑中生物堿成分的分析 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 二、理化性質(zhì) 紫外光譜特性 ? 結構中具有 共軛體系 的生物堿均有紫外吸收 ? 結構中的氮原子與發(fā)色團直接連接或參與發(fā)色團的生物堿，其吸收峰位置與測定時溶劑的 pH有關 。 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 三、定性鑒別 一般理化鑒別 ? 沉淀反應是生物堿理化鑒別常用方法，此反應一般在酸性水溶液 中進行 ? 制備樣品供試液時必須凈化處理，防止假陽性結果 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 三、定性鑒別 薄層色譜法 ①吸附劑： 硅膠 、氧化鋁； ②展開劑：多以 氯仿 、苯等低極性溶劑，加入其他溶劑調(diào)整展 開劑的極性； ③由于 硅膠顯弱酸性， 強堿性的生物堿在硅膠色譜板上能形成 鹽， 使 Rf值很小或拖尾、形成復斑等 。 ④顯色劑： 常用改良碘化鉍鉀試劑 ，有時噴 碘化鉍鉀 試劑之后 再噴硝酸鈉試劑，可使樣品斑點更加清晰。 如有熒光，不用顯色 ⑤ 亦可用碘蒸汽、硫酸鈰、碘鉑酸等其他的試劑顯色。 討論：如何改進？ 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 三、定性鑒別 紙色譜法 ? 可用于生物堿鹽或游離堿的鑒別 HPLC： ? 保留時間定性 GC： ? 可用于小分子生物堿的鑒別 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 四、含量測定 （一）總生物堿的含量測定 化學分析法 ①主要使用 酸堿滴定法 。 ②強堿滴定生物堿鹽時，在 70%~90%的乙醇介質(zhì)中終點比在水中明顯，因此常將生物堿鹽溶于 90%乙醇，再用標準堿乙醇液滴定。 ③若選擇的溶劑及指示終點方法合適，還可用非水滴定法進行 ④要求：總生物堿的 純度較高 ，用于藥味少成分簡單制劑的測定 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 四、含量測定 （一）總生物堿的含量測定 分光光度法 （ 1）直接測定法 ①不經(jīng)過化學反應、利用生物堿物質(zhì) 自身的光吸收 直接進行比色測定的方法。 ②一般用于 藥味較少 、 干擾小 的中藥制劑中總生物堿的含量測定。 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 四、含量測定 （一）總生物堿的含量測定 （ 2）酸性染料比色法 （例題 P101） 原理： BH++ In → BH+In（水相） → BH +In（有機相） 關鍵： ? 酸性染料的選擇 ：甲基橙、 溴麝香草酚蘭 （ BTB）和溴甲酚綠等； ? pH值的選擇： 與生物堿和酸性染料的性質(zhì)有關。 ? 有機溶劑的選擇： 一般用 氯仿、二氯甲烷 ? 水分的干擾及消除 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 四、含量測定 （一）總生物堿的含量測定 （ 3）雷氏鹽比色法 原理： BH++ [Cr(NH3)2(SCN)4]→ BH [Cr(NH3)2(SCN)4] 測定方法： （復鹽沉淀） 復鹽沉淀 → 溶于 丙酮（或甲醇） → 直接比色測定 樣品＋ 定量過量的雷氏鹽 → 過濾 → 濾液 → 比色測定 λmax=520nm （ 4）異羥肟酸鐵比色法 用于含有酯鍵結構的生物堿的測定 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 四、含量測定 （二）單體生物堿成分含量測定 TLCS ① 生物堿不具有紫外吸收或揮發(fā)性時可用本法測定； ②選用的吸附劑、展開劑及顯色方法與鑒別相似； ③使用改良 碘化鉍鉀等 作為顯色劑時，必須完全揮干展開劑后（尤其在堿性環(huán)境下展開的）才可噴灑，否則背景深、反差小，影響測定。 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 四、含量測定 （二）單體生物堿成分含量測定 HPLC(例題 P105) ① 以 反相高效液相 色譜應用較多； ②在反相高效液相色譜中，由于硅膠表面殘留硅醇基的影響，使生 物堿分析易產(chǎn)生保留時間延長、峰形變寬、拖尾； ③可在流動相中加入 硅醇基抑制劑 、 離子對試劑等 措施以克服游離 硅醇基的影響，滿足定量分析的要求； ④中藥制劑中生物堿成分進行高效液相色譜法測定時，使用較多的 是 紫外檢測器。 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 四、含量測定 （二）單體生物堿成分含量測定 GC ① 只適用于有揮發(fā)性的，遇熱不分解的生物堿類，如麻黃堿、檳榔 堿、苦參堿和顛茄類生物堿等 ②制備供試品溶液時一般應采用 冷提取 ，凈化過程也要避免加熱以 防成分的流失，最后需用氯仿等低極性有機溶劑為溶媒制備成供試 液。 藥物分析學科 第一節(jié) 生物堿類成分分析 五、常見生物堿成分分析 化合物名稱 結構式 理化性質(zhì)、結構及 光譜特征 常用定量分析方法 小檗堿 （黃連素） Berb