westernblot相關試劑與步驟(已修改)
2025-05-27 23:33 本頁面
【正文】 ., .. ..Western Blot蛋白測定步驟三蒸水制備后需要高壓消毒一、組織的采集（一）器材和試劑準備：鑷子、眼科剪、70%乙醇（三蒸水配制）、液氮（二）步驟（以心臟為例）:脫頸椎處死小鼠，讀取小鼠編號乙醇消毒胸部，剪開胸腔，剪下心臟（一顆心臟約100mg），排除血液，放入離心管，投入液氮中組織于80攝氏度凍存二、組織蛋白的提?。海ㄒ唬┢鞑暮驮噭蕚洌?mL離心管、15mL管、研磨機、鑷子、冰盒、離心機、 RIPA蛋白裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay，詳見下載的網(wǎng)頁）（碧云天公司）、PMSF （Phenylmethanesulfonyl fluoride，苯甲基磺酰氟，詳見下載的網(wǎng)頁prod號36978，Thermo Scientific）、70%乙醇、三蒸水（二）步驟準備好三管10mL70%乙醇、一管三蒸水；取出RIPA和PMSF解凍按照1mLPIRA ：10uLPMSF ：100mg組織的比例，加試劑和組織于4mL離心管按照三管10mL70%乙醇、一管三蒸水的順序依次洗滌研磨鉆頭（每管5秒），再研磨組織，上下且圓周運動離心管。每管研磨的轉速和時間保持一致。當出現(xiàn)大量泡沫時即可停止靜置于冰盒30分鐘12000rpm，4攝氏度，30分鐘先取100uL上清于離心管，再取300uL上清于離心管。前者用于測試，后者備用。80攝氏度凍存。注意：購置的RIPA不宜反復凍融，需分裝80攝氏度保存；PMSF為晶體狀，購置后按照說明書溶于異丙醇，分裝80攝氏度保存三、蛋白上樣量定量采用BCA法測蛋白（BCA protein assay kit，Prod號23225，詳見下載的網(wǎng)頁，Thermo
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