westernblot相關(guān)試劑與步驟(文件)
【正文】 水制備后需要高壓消毒一、組織的采集（一）器材和試劑準(zhǔn)備：鑷子、眼科剪、70%乙醇（三蒸水配制）、液氮（二）步驟（以心臟為例）:脫頸椎處死小鼠，讀取小鼠編號乙醇消毒胸部，剪開胸腔，剪下心臟（一顆心臟約100mg），排除血液，放入離心管，投入液氮中組織于80攝氏度凍存二、組織蛋白的提取：（一）器材和試劑準(zhǔn)備：4mL離心管、15mL管、研磨機(jī)、鑷子、冰盒、離心機(jī)、 RIPA蛋白裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay，詳見下載的網(wǎng)頁）（碧云天公司）、PMSF （Phenylmethanesulfonyl fluoride，苯甲基磺酰氟，詳見下載的網(wǎng)頁prod號36978，Thermo Scientific）、70%乙醇、三蒸水（二）步驟準(zhǔn)備好三管10mL70%乙醇、一管三蒸水；取出RIPA和PMSF解凍按照1mLPIRA ：10uLPMSF ：100mg組織的比例，加試劑和組織于4mL離心管按照三管10mL70%乙醇、一管三蒸水的順序依次洗滌研磨鉆頭（每管5秒），再研磨組織，上下且圓周運動離心管。前者用于測試，后者備用。2) 分離膠緩沖液 ( PH ） Tris 1mol/L HCL 調(diào)節(jié)PH（可以使用分析純級別的濃鹽酸，下同） dddH2O 定容至100mL，4℃保存3) (PH 6. 8）： Tris 1mol/L HCL 調(diào)節(jié)PH dddH2O 定容至100mL，4℃保存4) 10% SDS溶液：SDS dddH2O定容至100ml，室溫保存5） 10%過硫酸銨（AP）：過硫酸銨 ，4℃保存，要在一周內(nèi)使用，最好新鮮配制6）TEMED 遮光保存，分裝于EP管凍存五、電泳
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1