實(shí)驗(yàn)三feulgen反應(yīng)顯示dna(1)(已修改)
2025-05-25 01:12 本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)三 Feulgen反應(yīng)顯示 DNA 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1．掌握臨時(shí)制片法。 2．熟悉 Feulgen反應(yīng)的原理及操作步驟。 3．觀察細(xì)胞中 DNA的分布 二、實(shí)驗(yàn)原理 DNA經(jīng)酸（ 1mol/L HCl）水解后，分子中的嘌呤和脫氧核糖連接的配糖鍵被打開，脫氧核糖的一端釋放出游離的醛基，并在原位與 Schiff試劑反應(yīng)形成特異性的紫紅色產(chǎn)物。該產(chǎn)物能特異地吸收 550~570nm的光波。并且在一定的濃度范圍內(nèi)對(duì) 550~570nm光波的吸收值與 DNA含量成正比關(guān)系，符合化學(xué)計(jì)量學(xué)關(guān)系。 對(duì)照組或采取不經(jīng)鹽酸處理，或預(yù)先用熱三氯醋酸或 DNA酶處理，抽提去細(xì)胞中的 DNA而得到陰性反應(yīng)，從而證明此反應(yīng)的專一性。 此法既可定位用于細(xì)胞或組織化學(xué)染色反應(yīng)，觀察DNA的分布，又可用顯微分光光度計(jì)和圖像分析儀對(duì)細(xì)胞或組織中 DNA的含量進(jìn)行定量分析。 1950年， Swift Feulgen顯微分光光度法，測(cè)定了一些生物各種組織中單個(gè)細(xì)胞的 DNA含量，定義為 C值。 Feulgen反應(yīng)對(duì) DNA染色穩(wěn)定、顏色鮮明、能定量，因此在細(xì)胞化學(xué)和組織化學(xué)中成為一個(gè)既古老、傳統(tǒng)又經(jīng)久不衰的DNA標(biāo)記方法。 Schiff試劑是由堿性品紅和偏重亞硫酸鈉 /鉀作用，形成無色的品紅液。無色品紅與醛基結(jié)合則形成紫紅色的化合物，這是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)含有發(fā)色基團(tuán)醌基所引起的。 三、實(shí)驗(yàn)器具與藥品 l 每一個(gè)學(xué)生 復(fù)式顯微鏡 （ 帶油浸物鏡 ） （ microscope） l 每一組學(xué)生 擦鏡紙；記號(hào)筆；小片濾紙；載玻片；鑷子；移液槍 四膜蟲培
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