分子雜交ppt課件(已修改)
2025-05-24 06:23 本頁面
【正文】 核酸分子雜交 Nucleic Acid Hybridization 1 分子雜交概念及應(yīng)用 分子雜交： 在分子克隆中的一類核酸和蛋白質(zhì)分析方法，用于檢測(cè)混合樣品中特定核酸分子或蛋白質(zhì)分子是否存在，以及其相對(duì)分子質(zhì)量的大小。 分子雜交實(shí)質(zhì)上是 DNA或 RNA單鏈之間退火形成 DNA/RNA或 DNA/DNA雜合分子。 應(yīng)用范圍： 重組子鑒別 基因分離 DNA片段分析 基因表達(dá)研究 。 當(dāng)用一個(gè)標(biāo)記核酸分子與核酸樣品雜交，便可以查明該樣品中是否存在與該標(biāo)記核酸分子具有同源性的分子。 2 探針的概念及其標(biāo)記技術(shù) 探針 (probe): 用于檢測(cè)特定基因或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物存在或表達(dá)的 DNA、 RNA或寡核苷酸。 探針的標(biāo)記技術(shù) 均勻標(biāo)記 末端標(biāo)記 均勻標(biāo)記 ⑴ 切口平移法標(biāo)記 DNaseI HO P 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ DNaseI與 Pol I 的 切口移位 Pol I ⑵ 隨機(jī)引物標(biāo)記 ⑶ PCR擴(kuò)增標(biāo)記 要求： [a32P]dNTP 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 熱變性 隨機(jī)引物 退火 ?32PdNTP Klenow 酶 ~~ 5’ 5’~~ 5’~~ ~~
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