cr技術(shù)及應(yīng)用jyhppt課件(已修改)
2025-05-17 12:06 本頁面
【正文】 PCR技術(shù)及應(yīng)用 分子生物學(xué)診斷組 江楊華 2022年 3月 25日 星期五 ? PCR的定義 ? PCR的原理 ? PCR反應(yīng)體系的的成分及其作用 ? PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化 ? PCR技術(shù)的特點(diǎn) ? PCR產(chǎn)物的檢測方法 ? PCR技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用 一、 PCR的定義 ?PCR（ polymerase chain reaction) ： 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，又稱體外 DNA擴(kuò)增技術(shù)。是近年來發(fā)展起來的一種體外擴(kuò)增 DNA片段的技術(shù)。 ? PCR技術(shù)是由 美國 的 Kary Mullis 于 1985年 發(fā)明 ，用此方法可以 將微量目的 DNA片段擴(kuò)增一百萬倍 以上。由于 PCR方法 帶來的 革命性作用， Kary Mullis 本人因此獲 1993年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng) 。 二、 PCR技術(shù) 的原理 PCR技術(shù)，其原理是模擬天然 DNA的復(fù)制過程：以擬擴(kuò)增的 DNA分子為模板，在 DNA聚合酶的作用下，以一對分別與模板 5′末端和3′末端互補(bǔ)的引物（寡核苷酸片段）引導(dǎo)下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制合成新的子鏈 DNA的過程，重復(fù)這一過程，即可使目的 DNA片段得到不斷的擴(kuò)增。 二、 PCR技術(shù) 的原理 PCR反應(yīng)主要分為三個(gè)步驟：變性、退火、延伸。 (Denaturation)： 加熱 使模板 DNA雙 鏈堿基間 的氫鍵斷裂而形成兩條 單鏈的過程。溫度一般為 9095度。 2. 退火 (復(fù)性 ) (Annealling): 溫度降低 后，變性后的 DNA與引物 按堿基配對原則互補(bǔ) 結(jié)合的過程。 溫度一般 為 Tm5度。 二、 PCR技術(shù) 的原理 3. 延伸 (Extension): 在適宜溫度下，在 DNA聚合酶作用下，以 4種 dNTPs等為 原料，從引物的 3′ 端開始，結(jié)合單核苷酸，形成與模板鏈互補(bǔ)的新 DNA鏈的過程。 耐熱 DNA聚合酶最適溫度為 72 ℃ 。 上述 3 步為一個(gè)循環(huán)，每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，樣本中的DNA量就增加一倍，新形成的鏈又可成為新一輪循環(huán)的模板，經(jīng)過 35個(gè)循環(huán)后，理論上 DNA的量可達(dá)到 235倍。 PCR 的基本反應(yīng)步驟 變性 95?C 延伸 72?C
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