蛋白質(zhì)研究技術(shù)平臺(已修改)
2025-05-14 05:27 本頁面
【正文】 蛋白質(zhì)研究技術(shù)平臺 梁潔 開放實驗室 蛋白質(zhì)相關(guān)技術(shù) ?蛋白質(zhì)樣品的制備 ?蛋白質(zhì)濃度的測定 ?蛋白質(zhì)免疫印跡（ western blot) ?蛋白質(zhì)相互作用研究 蛋白質(zhì)樣品制備 ? 單層貼壁細胞總蛋白的提?。? (1)收集細胞（ 1*106以上） (2)加入適量含蛋白酶抑制劑的裂解液 (3)冰上裂解 (4) 4℃ 下 12022rpm離心 5min,取上清， 20 ℃ 保存 ? 組織中總蛋白的提取 (1) 取組織塊（約 ) 剪碎 ,加液氮磨碎、勻漿、超聲處理 (2) 4℃ 下 12022rpm離心 15min,取上清， 20 ℃ 保存 (3)膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要超濾 (4)組織中的蛋白酶活性更強，需要注意抑制蛋白酶的活性 蛋白質(zhì)樣品制備試劑 ? RIPA裂解配方 ： 50 mM TrisHCl pH 、 150 mM NaCl、1 mM PMSF、 1 mM EDTA、 1% Triton x100、 1%脫氧膽酸鈉 、 % SDS ? 蛋白酶抑制劑 ： 1 mM PMSF, Aprotinin 1μg/ml, Leupeptin 5μg/ml, pepestatin 1μg/ml, AEBSF 50μg/ml, Bestatin 10μg/ml, E64 1μg/ml ? PMSF 儲存液： 溶于異丙醇 (10mmol/L)或(100mmol/L),分裝后保存于 20℃ ， 使用時稀釋至 1mmol/L， 現(xiàn)用現(xiàn)加 。 產(chǎn)品名稱 Western 及 IP裂解液 RIPA裂解液（強） ) RIPA裂解液（中） RIPA裂解液（弱） NP40裂解液 SDS裂解液 產(chǎn)品價格 元 有效裂解成分 1% Triton X100 1% Triton X100, 1% deoxycholate, % SDS 1% NP40, % deoxycholate, % SDS 1% NP40, % deoxycholate 1% NP40 1% SDS 裂解強度 溫和 強 中 溫和 溫和 強 對膜蛋白的裂解 一般 很好 較好 一般 一般 很好 對胞漿蛋白的
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