植物細(xì)胞的獲取ppt課件(已修改)
2025-05-13 02:17 本頁面
【正文】 第二章 植物細(xì)胞的獲取 第一節(jié) 外植體的選擇與預(yù)處理 ? 成功關(guān)鍵： 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件、外植體的來源 。 ? 一、外植體的選擇 ? 從生長(zhǎng)正常，無病蟲害的母株中，選擇適宜的組織器官 ? 用于直接分離細(xì)胞的外植體的選擇 ? 原則：細(xì)胞之間粘連程度較??； ? 葉片最佳； ? 限制：機(jī)械或酶?jìng)?xì)胞，完整細(xì)胞較少。 ?用于愈傷組織誘導(dǎo)的外植體的選擇 ? 雙子葉植物中常用的外植體有： 幼胚、成熟胚、下胚軸、子葉、葉片、根等。 ? 單子葉植物中常用的外植體有： 幼胚 、 成熟胚 、細(xì)穗 、 花藥等 。 ? 無論是雙子葉植物還是單子葉植物 、 均以 幼胚誘導(dǎo)愈傷組織的為最佳 。 因?yàn)橛着哒T導(dǎo)的愈傷組織質(zhì)量最好 ， 分化能力強(qiáng) 。 ? 基因型的影響：不同種類及不同品種之間存在差異； ? 同一植物，不同部位脫分化和再分化能力存在差異：百合：外層＞內(nèi)層；紫草根＞莖葉；蘋果頂芽褐變程度＜側(cè)芽；蘭科：莖尖； ? 還要考慮生產(chǎn)目的：選用植株中主要生產(chǎn)所需的的次級(jí)代謝產(chǎn)物的組織和器官 ? 用于愈傷組織誘導(dǎo)的外植體的選擇 ? 外植體的生理狀態(tài)：紅豆杉：新生的嫩枝； ? 取材季節(jié)：母株生長(zhǎng)旺盛的季節(jié)；紫草：秋天（紫草寧合成和積累）； ? 外植體大?。哼m當(dāng)大??；脫毒率和莖尖大小及成活率之間的關(guān)系； ? 用于分離原生質(zhì)體的外植體的選擇 ? 分離原生質(zhì)體則以葉片為最好。苗齡與葉齡有關(guān)；太老不易游離，太嫩，易游離，但細(xì)胞膜易損害； ? 以苗齡 15－ 25d，剛展開的幼葉為最佳。 ? 無菌苗幼葉； ? 還要考慮培養(yǎng)目的； ? 多數(shù)情況下，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定； ? 花粉材料的選擇 ? 用作花粉培養(yǎng)的親本植株的 基因型 、 生長(zhǎng)情況 以及接種時(shí)花粉所處的 發(fā)育時(shí)期 ，對(duì)花粉植株的誘導(dǎo)頻率都有直接的影響。 ? 關(guān)鍵選取處于合適發(fā)育期的花藥，離體培養(yǎng)后才能啟動(dòng)花粉發(fā)育。實(shí)踐表明，從減數(shù)分裂期至雙核期的花藥，均有可能誘導(dǎo)離體孤雄發(fā)育。 ? 大多數(shù)園藝植物的花藥培養(yǎng)，成功率最高的時(shí)期為 單核期，或單核中晚期 。 ?四分體－－小孢子－－單核花粉－－雙核花粉 花粉的發(fā)育時(shí)期 花藥培養(yǎng)屬于器官培養(yǎng)范疇 花粉培養(yǎng)也稱為小孢子培養(yǎng)。 是從花藥中分離出花粉粒 ,使之成為分散的或游離的狀態(tài) ,通過培養(yǎng)使花粉粒脫分化 ,進(jìn)而發(fā)育成完整植株的過程 .屬于細(xì)胞培養(yǎng)的范疇 外植體的滅菌處理 常用表面滅菌劑使用濃度及效果比較表 二、外植體的預(yù)處理 幾種常用消毒劑的效果比較 消毒劑 使用濃度 消毒時(shí)間 效果 殘液去除難易 次氯酸鈣 /鈉 10 530 好 易 新潔爾滅 10－ 20 530 好 易 氯化汞 － 1 210 最好 最難 過氧化氫 10－ 12 515 較好 最易 抗菌素 4－ 50mg/L 3060 較好 較難 外植體表面滅菌過程： ? 選材 刷洗 、 沖洗 用洗衣粉水或肥皂水浸洗并攪動(dòng) 自來水沖凈洗衣粉水 70％酒精浸泡 10～ 30秒振蕩 ％ 升汞 3～ 10分鐘 (表 面 活 性 劑 ) 無 菌 水 沖 先 3～ 5次 接種 外植體的其他處理 ? 目的： 提高愈傷組織誘導(dǎo)率；促進(jìn)原生質(zhì)體游離。 ? 方法： ? 預(yù)培養(yǎng)； ? 暗處理； ? 低溫或高溫處
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