多抗制備ppt課件(已修改)
2025-05-10 23:16 本頁面
【正文】 多克隆抗體的制備及 抗體效價(jià)測(cè)定 目的要求 ? 掌握多克隆抗體制備的基本原理。 ? 掌握多克隆抗體制備的操作步驟。 ? 掌握肥達(dá)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)原理、操作流程和結(jié)果判斷。 ? 熟悉 ELISA的實(shí)驗(yàn)原理、操作流程和結(jié)果判斷。 ? 了解細(xì)菌抗原和病毒抗原免疫程序上的異同。 ? 了解免疫動(dòng)物的選擇原則。 原理 克隆 (clone)： 是指無性繁殖細(xì)胞系，是由單一個(gè)祖先細(xì)胞分裂繁殖而形成的一簇細(xì)胞純系。在這個(gè)家族的所有成員中，如無突變發(fā)生，其基因是完全相同的。 多克隆抗體（ polyclonal antibody, pAb）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體 多個(gè) B細(xì)胞克隆 產(chǎn)生針對(duì) 多種抗原表位 的不同抗體。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有 多種抗體的混合物，即多克隆抗體 。 單克隆抗體（ monoclonal antibodies, mAb）：由一個(gè) 識(shí)別一種抗原表位 的 B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體。高度均一、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、少或無交叉反應(yīng)性。 抗體的制備技術(shù)經(jīng)歷了三代 ： ? 第一代抗體是傳統(tǒng)的抗體制備方法即利用抗原免疫動(dòng)物后獲得抗體，稱為多克隆抗體（ polyclonal antibody）； ? 第二代抗體是通過雜交瘤技術(shù)制備出針對(duì)抗原中某一抗原決定簇的抗體稱為單克隆抗體 (monoclonal antibody, McAb)； ? 第三代抗體是利用基因工程技術(shù)制備而來，稱為基因工程抗體 (geic engineering antibody)。 Ab1 Ab3 Ab4 單克隆抗體 抗原 Ab1 抗血清 Ab1 Ab2 Ab3 Ab4 Ab2 Ab3 Ab4 普通抗血清（多克隆抗體） 脾 B細(xì)胞 骨髓瘤小鼠取腹水 骨髓瘤細(xì)胞 HAT培養(yǎng)，稀釋 單克隆抗體和多克隆抗體產(chǎn)生區(qū)別示意圖 雜交瘤細(xì)胞 + PEG, 融合 多克隆抗體制備流程 ? （一）免疫原的制備 ? （二）免疫動(dòng)物 ? （三）免疫血清的收集 ? （四）免疫血清的鑒定 ? （五）免疫血清的保存 操作步驟 一、免疫原的制備 免疫原 （ immunogen）指能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體或致敏淋巴細(xì)胞的抗原最重要的性質(zhì)是 免疫原性（ immunogenicity） 免疫原 — 天然抗原、人工 合成抗原； 蛋白質(zhì)、多糖、脂類、核酸抗原； （一）細(xì)胞性抗原制備： 綿羊紅細(xì)胞（ SRBC） 溶血素； 細(xì)菌 抗菌抗體（動(dòng)物免疫血清） （二）可溶性抗原制備： 指蛋白質(zhì)、多糖和脂類等。 1）細(xì)胞的破碎（物理法、化學(xué)法） ? 反復(fù)凍融法 ? 超聲破碎法 ? 自溶法 ? 酶處里法 ? 表面活
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