電鏡樣品的制備ppt課件(已修改)
2025-05-17 03:05 本頁(yè)面
【正文】 第五章 掃描電鏡生物樣品制備技術(shù) 常規(guī)電鏡樣品要求 ： 必須 是干燥的，不含水分或可揮發(fā)性物質(zhì)； 具有一定機(jī)械強(qiáng)度，能耐受電子束轟擊； 具有導(dǎo)電性，被激發(fā)時(shí)能夠產(chǎn)生足夠的二次電子 。 生物材料特點(diǎn) ： 含水分多，質(zhì)地柔軟，機(jī)械強(qiáng)度??； 組成元素的原子序數(shù)低，導(dǎo)電性差， 激發(fā)后二次電子的產(chǎn)額較少。 制樣的任務(wù) ： 通過(guò)一系列處理，既要盡量完美地保存材料的固有形態(tài)， 又要改良其物理性能，使其適合在電鏡下觀察成像 。 主要內(nèi)容 ：第一節(jié) SEM樣品的常規(guī)制備技術(shù) 第二節(jié) 特殊要求的掃描制樣技術(shù) 第一節(jié) 掃描電鏡樣品的常規(guī)制備技術(shù) 冷凍 斷裂 粘樣或滴樣 熏蒸固定 干燥 花粉、種子及孢子類樣品 管道鑄型 腔形器官 取材 清 洗 固 定 脫水 干燥 粘樣 鍍膜 鏡檢 清洗 菌類和組培細(xì)胞 取材 清洗 固定 脫水 干燥 粘樣 鍍膜 鏡檢 一、取材 即： 獲取觀察材料 。 遵循五字原則： 準(zhǔn)、輕、小、凈、濃 ： 取材動(dòng)作要快，部位要準(zhǔn)確。 方法 ：因材料而異，通過(guò)破碎、解剖、切割、 分離、提純等手段，獲取樣品 最佳觀察面 。 ：保護(hù)好擬觀察面 。 解剖器械要鋒利，不能對(duì)材料施加鋸、擠、拉壓 的外力。含水分多的、幼嫩材料最好冷凍斷裂法。 ： 滿足觀察條件的最小體積，厚度為 1~2毫米 ： 花粉、孢子類樣品注意防塵、防混雜 合適的濃度 ： 濃度太大造成樣品堆積；濃度小則檢出困難。 取材 清洗 固定 脫水 干燥 粘樣 鍍膜 鏡檢 二清洗：確保得到 清潔 的 觀察表面 三次清洗 ?固定前清洗：洗去表面的灰塵、黏液等附著物， 確保 獲得清潔的觀察表面 。 ? 前固定后清洗：洗凈醛類固定液，以免戊二醛與鋨酸 反應(yīng)而 削弱 鋨酸的固定效果 。 ? 脫水前的清洗：洗凈固定液，以免固定液與脫水劑 反應(yīng)而 產(chǎn)生沉淀 ，影響觀察效果。 ：蒸餾水、生理鹽水、加酶清洗液等 ? 選擇原則 ：清洗液的 pH值 、 滲透壓 、 溫度 應(yīng)該盡量接近樣品的 生理值 ，以免樣品因環(huán)境突變而導(dǎo)致形態(tài)變化 。 ?植物材料：蒸餾水洗凈塵埃； ?動(dòng)物材料： 等滲 生理鹽水、 5%碳酸鈉或緩沖液洗去黏液等； ?游離細(xì)胞：用 等滲 的緩沖液清洗 (精子、血
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