微生物及酶工程制藥復(fù)習(xí)2(已修改)
2025-04-29 01:15 本頁面
【正文】 二、 問答4. 如何從環(huán)境中篩選稀有放線菌中的小單孢菌，并說明各步驟的作用？（一）所謂的稀有放線菌：即為除鏈霉菌屬外的其它屬的放線菌。如：小單孢菌、小雙孢菌、馬杜拉放線菌等。選擇培養(yǎng)分離——微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化：（1）抑制大多數(shù)其它微生物的生長。（2）使待分離的微生物生長更快?！?使待分離的微生物在群落中的數(shù)量上升，方便用稀釋法對其進(jìn)行純化。（3）使待分離的微生物生長“突出”。→ 直接挑取分離的微生物的菌落獲得純培養(yǎng)。1）①利用選擇培養(yǎng)法進(jìn)行直接分離：Ⅰ、高溫下培養(yǎng)：分離嗜熱細(xì)菌。 Ⅱ、培養(yǎng)基中不含N：分離固氮菌。 Ⅲ、培養(yǎng)基加抗生素：分離抗性菌。 ②利用選擇平板進(jìn)行直接分離：Ⅰ、牛奶平板：分離蛋白酶產(chǎn)生菌。 Ⅱ、顏色反應(yīng)：分離特定的菌株。 Ⅲ、利用特定細(xì)菌的滑動特點(diǎn)進(jìn)行分離純化。2）富集培養(yǎng)：特定的環(huán)境條件→僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長→待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加→從自然界中分離到所需的特定微生物（二）高選擇性分離小單孢菌的程序：土樣自然風(fēng)干→制成土壤懸浮液→1~5%苯酚處理→涂布平板（HV瓊脂+萘啶酸20mg/L+衣霉素20mg/L）衣霉素和萘啶酸作為細(xì)菌、真菌和非目的放線菌的抑制劑。6. 如何利用同位素標(biāo)記法研究微生物藥物生物合成的機(jī)理？將同位素標(biāo)記可疑前體物質(zhì)加到培養(yǎng)基中→培養(yǎng)后分離目的代謝產(chǎn)物→測定終產(chǎn)物中同位素含量和分布情況→判斷可疑前體物質(zhì)是否參與代謝產(chǎn)物的合成16. 如想開發(fā)生產(chǎn)葡萄糖苷酶的基因工程菌，該如何構(gòu)建？如想進(jìn)一步提高該酶的表達(dá)量，該如何進(jìn)行？假如重組表達(dá)的酶以包涵體形式存在，以你學(xué)到的知識分析應(yīng)該采取什么措施？基因工程酶（蛋白）的構(gòu)建（1）基因的獲?。ㄍㄟ^NCBI搜索欲構(gòu)建的葡萄糖苷酶的基因序列，再設(shè)計(jì)引物，以所需的cDNA為模板PCR獲得）。（2）目的基因與表達(dá)載體的體外重組。（3）導(dǎo)入宿主細(xì)胞。（4）篩選和驗(yàn)證。（5）目的基因的表達(dá)。提高表達(dá)量：（1）利用高效表達(dá)質(zhì)粒（強(qiáng)啟動子和高拷貝）。 （2）優(yōu)化密碼子。 （3）優(yōu)化翻譯起始區(qū)的二級結(jié)構(gòu)。 （4）使ATG和SD序列之間距離為9bp。 （5）優(yōu)化表達(dá)條件。減少包涵體：（1）降低培養(yǎng)溫度。 （2）減少誘導(dǎo)劑的使用量。 （3）12. 論述抗生素的作用機(jī)理？（1）抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。（2）增加細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性。
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