電泳技術(shù)和常用電泳儀【精品(已修改)
2025-01-30 19:01 本頁面
【正文】 第六章 電泳技術(shù)和常用電泳儀 第六章 電泳技術(shù)和常用電泳儀 一、概述 generalization) 電泳（ electrophoresis）是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)（ electrophoresis technique）?？梢詫崿F(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器稱之為電泳儀（ electrophoresister）。 第六章 電泳技術(shù)和常用電泳儀 目前， 電泳技術(shù)已廣泛用于蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核苷酸、無機離子等成份的分離和鑒定，甚至還用于細胞與病毒的研究。 臨床常用的電泳分析方法主要有醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳和毛細管電泳等。 第一節(jié) 電泳原理 一、電泳的基本原理 物質(zhì)分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負電荷量相 等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學(xué)反應(yīng)條件下，某些物質(zhì)分子會成為帶電的離子（或粒子），不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒形狀和大小不同，因而在一定的電場 中它們的移動方向和移 動速度也不同，因此可 使它們分離。 0601電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象 。 第一節(jié) 電泳原理 若將帶凈電荷 Q的粒子放入電場，則該粒子所受到的電荷引力為： F引 =E Q （ 61） 在溶液中 ,運動粒子與溶液之間存在阻力 F阻 F阻 =6πrηV （ 62） 當 F引 =F阻 時 EQ= 6πrηV V = EQ/6πrη （ 63） 由上式可以看出 ,粒子的移動速度 (泳動速度 V)與電場強度 (E)和粒子所帶電荷量 (Q)成正比 ,而與粒子的半徑 (r)及溶液的粘度 (η)成反比。 第一節(jié) 電泳原理 二、影響電泳的外界因素 （一）電場強度 （二）溶液的 pH值 （三）溶液的離子強度 （四）電滲作用 （五）粒子的遷移率 （六）吸附作用 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 一、電泳技術(shù)的分類 （一）根據(jù)工作原理的不同：可分為移界電泳、區(qū)帶電泳、等速電泳、等電聚焦電泳、免疫電泳等。 （二）根據(jù)有無固體支持物可分為：自由電泳和支持物電泳 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （三）根據(jù)支持載體的位置或形狀可分成：水平電泳、垂直電泳、板狀電泳、柱狀電泳、 U型管電泳、倒 V字形電泳、毛細管電泳等。 （四）根據(jù)支持物的特點又可分為： ①無阻滯支持物電泳。②高密度的凝膠電泳。 （五）根據(jù)電源控制的不同，一般可分為以下 3類： 1. 恒壓電泳 。 2. 恒流電泳 。 3. 恒功率電泳 。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （六）根據(jù)自動化程度的不同，可分為半自動和 全自動型。 （七）根據(jù)其功能的不同，可分為制備型、分析 型、轉(zhuǎn)移型、濃縮型等。 （八）根據(jù)用法的類型可分為：雙向電泳、交叉 電泳、連續(xù)紙電泳、電泳－層析相結(jié)合技術(shù)等。 （九）根據(jù)不同的使用目的可分為：核酸電泳、 血清蛋白電泳、制備電泳、 DNA測序電泳等。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 二、電泳方法簡介 （一）紙電泳 指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。 0602 平臥式電泳槽裝置示意圖 將濾紙條水平地架設(shè)在兩個裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（ 100V～ 1000V） 進行電泳 。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （二）醋酸纖維素薄膜電泳 電泳時經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、 電泳時間短、樣品 用量少。因此特別 適合于病理情況下 微量異常蛋白的檢測。 0603 血清蛋白的電泳圖譜 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （三）凝膠電泳 由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質(zhì)作支持物進行電泳的方式，被稱為凝膠電泳。普通的凝膠電泳在板上進行，以凝膠作為介質(zhì)。電泳中常用的凝膠為葡聚糖、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖。 它具有機械強度好、彈性大、 透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無電滲 作用、設(shè)備簡單、樣品量小 (1～ 100μg ） 、分辨率高等優(yōu)點。 0604 凝膠電泳圖 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （四）等電聚焦電泳 1． 等電聚焦電泳過程 一種利用有 pH值梯度的介質(zhì)，分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。 將等電點不同的蛋白質(zhì)混合物加入有 pH值梯度的凝膠介質(zhì)中，在電場內(nèi)經(jīng)過一段時間后，各組分將分別聚焦在各自等電點相應(yīng)的 pH值位置上，最后，樣品的各組分在各自的等電點聚焦成一條清晰而穩(wěn)定的窄帶。 0605 凈電荷與 PH的關(guān)系曲線 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 2．等電聚焦電泳的特點 ①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的 pH梯度；②由于 “ 聚焦效應(yīng) ” ，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；③電泳速度快 。④ 分辨率高 。⑤ 加入樣品的位置可任意選擇；⑥可用于測定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點 。⑦ 適用于中
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