質(zhì)粒圖譜的閱讀word版(已修改)
2025-01-29 21:41 本頁面
【正文】 質(zhì)粒圖譜的閱讀質(zhì)粒圖譜的閱讀載體主要有病毒和非病毒兩大類,其中質(zhì)粒DNA是一種新的非病毒轉(zhuǎn)基因載體。一、一個(gè)合格質(zhì)粒的組成要素? 復(fù)制起始位點(diǎn)Ori 即控制復(fù)制起始的位點(diǎn)。原核生物DNA分子中只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)。而真核生物DNA分子有多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)。? 抗生素抗性基因 可以便于加以檢測，如Amp+ ,Kan+? 多克隆位點(diǎn)MCS 克隆攜帶外源基因片段? P/E 啟動(dòng)子/增強(qiáng)子? Terms 終止信號(hào)? 加poly（A）信號(hào) 可以起到穩(wěn)定mRNA作用二、如何閱讀質(zhì)粒圖譜第一步：首先看Ori的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）第二步：再看篩選標(biāo)記，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。（1）Ampr 水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。（2）tetr 可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。（3）camr 生成氯霉素羥乙酰基衍生物，使之失去毒性。（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418（長那霉素衍生物）失活（5）hygr 使潮霉素β失活。第三步：看多克隆位點(diǎn)（MCS）。它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)。便于外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。第四步：再看外源DNA插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。這是用來區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體?？寺≥d體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1