細(xì)胞工程-第十二章、試管動(dòng)物與克隆動(dòng)物(已修改)
2025-01-29 11:13 本頁(yè)面
【正文】 第一節(jié) 試管動(dòng)物 1978年 7月 25日深夜時(shí)分，英國(guó)曼徹斯特郊外的奧德姆總醫(yī)院里，一個(gè)女?huà)氲奶淇蘼晞澠埔箍?，震撼了世?…… 她就是世界上第一例試管嬰兒 ——路易斯 .布朗。 一、試管動(dòng)物概念 將供體的精子和卵子在體外受精、體外培養(yǎng)胚胎，然后將發(fā)育到一定程度的胚胎移植入受體，可以得到各種動(dòng)物。由于體外受精一般都在試管內(nèi)進(jìn)行，所以稱為 “ 試管動(dòng)物 ” 。也有稱為 “ 體外受精動(dòng)物 ” 。 二、試管動(dòng)物的培育流程 精子 的采集與體外獲能處理 卵子 的回收與成熟培養(yǎng) 卵子與精子的 體外受精 受精卵的 體外發(fā)育 試管 胚胎的移植 １、精子的采集與獲能處理 ? 精液的采取方法通常有： 人工陰道法 、電刺激法 、 陰道內(nèi)回收法 等。 ? 對(duì)于個(gè)體較大的動(dòng)物多采用人工陰道法，而對(duì)于小動(dòng)物而言多采用電刺激法采精。 人工陰道法 ? 人工陰道法是由橡膠制造的雙層圓筒，兩層之間充以溫水（ 38℃ － 40℃ ），后端有精液收集管以軟橡膠膜袋與人工陰道相連。對(duì)于公牛而言，一般多應(yīng)用臺(tái)畜使爬上，將假陰道自側(cè)面套在公牛陰莖上，使其射精。在公豬可以用豬用假陰道收集精液或用手握法采精，但仍需要臺(tái)畜，使其爬上以遍進(jìn)行操作。 ? 另外，也可以用特制的電極，插到公畜的直腸內(nèi)，根據(jù)不同畜種給予不同的電流刺激，經(jīng)過(guò)不同的時(shí)間，即可射精而得到精液。 精液的保存 ? 精液的保存可以分為常溫（ 15－ 25℃ ）、低溫（ 0－ 5℃ ）和超低溫冷凍（－ 79℃ － 196℃ ）三種，其目的是要降低精子的代謝活動(dòng)，延長(zhǎng)其存活時(shí)間，盡量保存其受精能力。 ? 保存前，要加稀釋液，其成分按其作用可分為稀釋劑、營(yíng)養(yǎng)劑和保護(hù)劑等。 ? 稀釋劑 包括等滲氯化鈉溶液和某些鹽溶液， ? 營(yíng)養(yǎng)劑 包括糖類、奶類和卵黃等， ? 保護(hù)劑 包括有抗凍作用的營(yíng)養(yǎng)劑和其它一些如甘油、 DMSO、糖類等。 三種保存方法 ? 常溫保存 主要通過(guò)降低 pH值達(dá)到抑制精子的代謝活動(dòng)，一般可以保存 2天以上。 ? 低溫保存 主要是抑制其正常的代謝活動(dòng)，除豬外，其它家畜的保存效果均較好。 ? 如果應(yīng)用 超低溫 可以在液氮中長(zhǎng)期保存精液，用時(shí)可以即時(shí)解凍。 ? 對(duì)于不同的動(dòng)物，各種保存液的配制方法都有所差異的。 人為使得精子獲能 ? 可以利用自然交配法，即在交配后，由雌性生殖道回收精子。 ? 而雌性生殖道獲能沒(méi)有種屬特異性，因而可以由屠宰場(chǎng)取任何的動(dòng)物的子宮或在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)取小動(dòng)物的子宮給所需動(dòng)物的精子獲能。 ? 另外，可以利用人工配制的培養(yǎng)液使得精子獲能。 ２、卵子 的回收與成熟培養(yǎng) ? 人工采卵是得到卵母細(xì)胞的方法通常利用激素進(jìn)行誘導(dǎo)采卵或超數(shù)采卵。可以利用促性腺激素或黃體激素釋放激素（ LH－RH），對(duì)小鼠、大鼠和兔子等動(dòng)物進(jìn)行一次性投與誘發(fā)其排卵，排卵數(shù)目不變。 ? 以小鼠為例，通?？捎?3－ 5IU PMSG或 2－ 3IU hCG或 100μg FSH 或 100μgLH或－ LH－ RH皮下或腹腔內(nèi)注射，12－ 14小時(shí)可以有 70％－ 100％正常排卵。 采卵 （１）輸卵管內(nèi)采卵： 以鼠為例，一般為了防止干燥可將屠殺后取出的輸卵管放在平皿內(nèi)，用石蠟油覆蓋，在實(shí)體顯微鏡下找到輸卵管
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