動物細(xì)胞培養(yǎng)生物制藥ii(已修改)
2025-01-25 10:00 本頁面
【正文】 第 10講 動物細(xì)胞培養(yǎng)生物制藥 II 本節(jié)主要內(nèi)容 本節(jié)關(guān)鍵問題 一 適合大規(guī)模培養(yǎng)的細(xì)胞株 (Cell line) 是由原代培養(yǎng)經(jīng)傳代培養(yǎng)純化，獲得的以 一種細(xì)胞 為主的、能在體外長期生存的不均一的細(xì)胞群體。第一次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞即稱之為細(xì)胞系。 不能連續(xù)培養(yǎng)的為 有限細(xì)胞系 (Finite cell line)，能連續(xù)培養(yǎng)下去的為 連續(xù)細(xì)胞系(Infinite cell line)。 (Cell strain) 是指從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用 單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選 的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株。 細(xì)胞株的建立需要從細(xì)胞系群體中分離出一個細(xì)胞，并使其在體外繁殖成為新細(xì)胞群體。 毛細(xì)管法 形成單個細(xì)胞克隆的細(xì)胞群體 有限稀釋法 包括： 原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞 有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系（不具有接觸抑制現(xiàn)象；理想的藥物生產(chǎn)細(xì)胞） 二倍體細(xì)胞、異倍體細(xì)胞 融合細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞、基因工程細(xì)胞 貼壁型、非貼壁型 （ 1）原代細(xì)胞 雞胚細(xì)胞、原代兔腎細(xì)胞或鼠腎細(xì)胞、血液淋巴細(xì)胞 1949年，恩德斯（ Enders）利用人胚胎組織細(xì)胞生產(chǎn) 脊髓灰質(zhì)滅活疫苗 ，開創(chuàng)了動物細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行生物制藥的先河。 具有需要大量動物組織、成本高、費(fèi)時費(fèi)力等缺點(diǎn)。 藥物篩選、藥理研究。 （ 2）傳代細(xì)胞 二倍體細(xì)胞：具有正常細(xì)胞的特點(diǎn)：二倍體染色體、具有貼壁和接觸抑制特性、無致瘤性。有限細(xì)胞系（傳代次數(shù)一般都不超過 50代）。 WI38： 1961年 Wister 38研究所從女性高加索人的正常胚肺組織中獲得的一株人 2倍體細(xì)胞系 WI38。培增時間 24h；貼壁生長；第一批獲得批準(zhǔn)用于生產(chǎn)的二倍體細(xì)胞 ,對病毒敏感，第一個用于疫苗（脊髓灰質(zhì)滅活疫苗）生產(chǎn)。 MRC5：二倍體，成纖維，生長比 WI38快。 （ 3）轉(zhuǎn)化細(xì)胞 細(xì)胞轉(zhuǎn)化是指細(xì)胞發(fā)生 遺傳改變 而產(chǎn)生 永生 化，即由有限性細(xì)胞系轉(zhuǎn)化為連續(xù)性細(xì)胞系，可以在體外進(jìn)行 無限傳代和生長繁殖。 倍增時間短 ，對培養(yǎng)條件與生長因子 要求低 。 由于轉(zhuǎn)化細(xì)胞常常由于染色體斷裂而變成 異倍體 ，失去正常細(xì)胞的特點(diǎn)，開始時由于 安全性 不能確認(rèn)而沒有大量使用。隨著對腫瘤發(fā)生機(jī)制等研究的深入，轉(zhuǎn)化細(xì)胞于 20世紀(jì) 80年代獲得批準(zhǔn)用于生產(chǎn)。 轉(zhuǎn)化方法 體外培養(yǎng)的細(xì)胞自發(fā)出現(xiàn)的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。這種現(xiàn)象在許多正常二倍體長期傳代過程中出現(xiàn)?？赡艿囊蛩匕ǎ貉遒|(zhì)量、溫度或 pH不穩(wěn)定、病毒污染等。 采用誘導(dǎo)劑使正常細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。凡是可以改變 DNA結(jié)構(gòu)的因素都可以稱為誘導(dǎo)劑，包括化學(xué)、物理和病毒誘導(dǎo)劑。 CHO細(xì)胞 (Chinese hamster ovary cell)：從中國 倉鼠卵巢分離的細(xì)胞， 亞二倍體 ，有多種突變株。貼壁生長，也可以懸浮培養(yǎng)，對剪切力和滲透壓改變有較高的忍受能力。 CHO細(xì)胞能表達(dá) 糖基化蛋白藥物 ：組織纖維蛋白溶酶原激活劑 (Tissue plasminogen activator， tPA)、促紅細(xì)胞生成素（ Erythropoiefin， EPO）、乙型肝炎病毒表面抗原（ Hepatitis B virussurface antigen, HBsAg）、粒細(xì)胞集落刺激因子（ Granulocyte colony stimulating factor,GCSF）、 DNA酶 I、凝血因子 VIII等。 BHK21細(xì)胞 （ Baby hamster kidney cell）：是 1961年英國從幼地鼠的腎臟分離的細(xì)胞。成纖維樣，異倍體。常用于增殖病毒，制備疫苗和重組蛋白 (例如重組凝血因子VIII)。 Vero細(xì)胞 （ Vero cell） :是 1962年日本從非洲 綠猴腎 中分離的細(xì)胞。成上皮型， 異倍體 ，貼壁型，是最常用的大規(guī)模培養(yǎng)的動物細(xì)胞之一。 用于增殖病毒，包括多瘤病毒、脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病毒。 （ 4）融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞：脾臟 B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞。 無血清培養(yǎng)基中高密度懸浮生長。 抗體藥物生產(chǎn)。 二 動物細(xì)胞
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