體外放射配基結(jié)合分析及臨床應(yīng)用(已修改)
2025-01-20 06:36 本頁面
【正文】 體外放射配基結(jié)合分析及臨床應(yīng)用 盧漢平 中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 實驗核醫(yī)學(xué)教研室 Email: 受體放射配基結(jié)合分析 Radioligand Binding Assay of Receptor ,RBA 用放射性核素標(biāo)記配基與相應(yīng)的受體行特異性結(jié)合反應(yīng)從而對受體進行定性和定量的方法。 分離 配基受體復(fù)合物 放射配基 + 受體分子 分析受體數(shù)量和親和力 RBA的分類 ? 定性 RBA：通過反應(yīng)的量效關(guān)系及某些參數(shù)的變化等來判斷受體的類型、單位點或多位點系統(tǒng)、受體與配基相互作用的特點 (可逆或不可逆，受體間的合作作用 )。 ? 定量 RBA：在已知反應(yīng)性質(zhì)的基礎(chǔ)上，通過結(jié)合反應(yīng)分析組織或細胞中受體數(shù)目（ binding site,結(jié)合位點數(shù)）。 受體的免疫組織化學(xué)Immunohistochemistry 優(yōu)點： ? 強特異性（單個氨基酸水平） ? 高敏感性 ? 高分辨力 缺點： ? 半定量 ? 無法測定親和力 RBA相關(guān)的基本慨念 ? 受體 (receptor,R) ? 配基 (ligand,L)： 激動劑、激動劑、內(nèi)源性配基 受體與配基結(jié)合反應(yīng)的質(zhì)量作用定律 K1V1 [R]+[L] [RL] E K2V2 KD: 平衡解離常數(shù) [RT]: 受體初始濃度 (總濃度 ) [LT]:配基初始濃度 [RL]2[RL][RT+LT+Kd]+[RT][LT]=0 (Goldstein) ]RL[]RLLT][RLRT[KD ??? 受體 與配基結(jié)合反應(yīng)的主要特點： ? 可飽和性 (Saturability) ? 可逆性 (Reversibility) ? 特異性 (Specifity) ? 與生理效應(yīng)一致性。 受體的分類 四級分類： ? 類 (class) ? 亞類 （ subclass） ? 型 (type) ? 亞型 (subtype) 受體的類 單跨膜區(qū)段 單跨膜區(qū)段 G 蛋白偶聯(lián) 配基門控 有酶結(jié)構(gòu) 無酶結(jié)構(gòu) 7 跨膜區(qū)段 離子通道 配基舉例 生長因子 細胞因子 肽類 神經(jīng)遞質(zhì) 胰島素 生長激素 神經(jīng)遞質(zhì) 氨基酸 泌乳素 前列腺素 激酶區(qū)段 可溶性激酶 第二信使 離子 結(jié)構(gòu) ( 示意 ) 膜 膜外 膜內(nèi) 四大類膜受體示意圖 五類受體的名稱 1 2 3 4 5 配基門控離子通道受體 G蛋白偶聯(lián) 7次跨膜受體 有酶結(jié)構(gòu)的單次跨膜受體 無酶結(jié)構(gòu)的單次跨膜受體 核受體 RBA的 基本原理 飽和曲線 00 配基濃度 (n m o l / L )復(fù)合物濃度(nmol/L)R T = 0. 005 n m ol / LK D = 0. 05n m ol / LK D = 0. 20n m ol / LK D = 0. 10n m ol / L漸近線 [RT RL][L] [RT RL][LT RL] KD == == [RL] [RL] SB /F Slope= 1/Kd Bmax SB fmol/ml Sc atchard 作圖受體最大結(jié)合容量的表示方式 ? ? 胞漿及胞膜等的受體含量 : fmol/mg 蛋白 ? ? 胞核的受體含量 : fmol/mgDNA ? ? 完整細胞受體的含量 : 結(jié)合位點 / 細胞 (site/cell) 或 fmol/106cell RBA的基本方法 制備待測受體的離體標(biāo)本
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