實驗：豬胰蛋白酶的分離純化(已修改)
2025-01-20 01:55 本頁面
【正文】 《 生化工程 》 課程實驗 豬胰蛋白酶的分離純化 與 檢測 主要內(nèi)容 ? 實驗內(nèi)容 ? 實驗?zāi)康? ? 實驗原理 ? 實驗方法 ? 實驗結(jié)果 ? 實驗報告格式 實驗內(nèi)容 ? 一、豬胰蛋白酶的分離純化 ? 二、蛋白質(zhì)含量的測定 ? 三、酶活力的測定 ? 四、純化效果檢測 —— SDSPAGE電泳檢測 實驗?zāi)康? ? 掌握鹽析 沉淀法、透析法 及 離子交換層析的原理和操作過程； ? 熟悉胰蛋白酶分離純化的一般過程； ? 掌握胰蛋白酶活力測定方法及 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)。 實驗原理 ? 一、胰蛋白酶的基本特性 ? 二、本實驗采用的分離純化方法的原理 ? 1. 沉淀法 ? 2. 透析法 ? 3. 離子交換層析技術(shù) ? 三、胰蛋白酶活性測定原理 實驗原理 一、胰蛋白酶的基本特性 ? 胰蛋白酶是以 無活性的酶原 形式存在于動物胰臟中，在 Ca2+的存在下，被 腸激酶 或 有活性的胰蛋白酶 自身激活，從肽鏈 N端賴氨酸和異亮氨酸殘基之間的肽鍵斷開，失去一段六肽，分子構(gòu)象發(fā)生一定改變后轉(zhuǎn)變?yōu)?有活性的胰蛋白酶 。 ? 豬胰蛋白酶的分子量約為 kDa，其等電點約為pI=，最適 ～ ， 胰蛋白酶在 pH=3左右 較穩(wěn)定， Ca2+離子對胰蛋白酶有穩(wěn)定作用，在低溫條件下貯存數(shù)周內(nèi)酶的活性不發(fā)生明顯的改變。 Lys Val Asp Asp Asp Asp Gly Ile Lys Val Asp Asp Asp Asp Val His Ser S S S S 46 183 Gly Ile Val His Ser S S S S Enteropeptidase 腸激酶 Trypsin 胰蛋白酶 Active site The process of trypsinogen activation 胰蛋白酶原激活過程 實驗原理 二、本實驗采用的分離純化方法的原理 ? 鹽析沉淀法：用硫酸銨鹽析法將目的蛋白從粗提液中沉淀出來，使其得到濃縮，并除去部分雜質(zhì)（核酸、雜蛋白等）。 1. 沉淀法 實驗原理 二、本實驗采用的分離純化方法的原理 ? 由于膜兩側(cè)的 溶質(zhì)濃度不同 ，在 濃度差的作用下，高分子溶液（如蛋白溶液）中的小分子溶質(zhì)（如無機鹽） 透向 透析液一側(cè)，同時透析液中的緩沖液 滲入 蛋白溶液一側(cè)，經(jīng)過透析液反復(fù)換液后，即可達到脫鹽和置換緩沖液的目的。 1. 透析法 實驗原理 二、本實驗采用的分離純化方法的原理 ? 同類型的帶電離子間可自由地相互交換和競爭結(jié)合。 ? 蛋白
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