基因工程中的酶ppt課件(已修改)
2025-01-17 09:16 本頁(yè)面
【正文】 1 第三節(jié)基因工程中的酶學(xué) 關(guān)鍵詞： ?了解各種酶在基因工程中的作用 ?掌握限制性?xún)?nèi)切酶和連接酶的基本特性 ?逆轉(zhuǎn)錄酶在基因工程中參與了哪些反應(yīng)？ 2 3 重組 DNA技術(shù)中常用的工具酶 工具酶 功能 限制性核酸內(nèi)切酶 DNA連接酶 DNA聚合酶 I 反轉(zhuǎn)錄酶 多聚核苷酸激酶 末端轉(zhuǎn)移酶 堿性磷酸酶 識(shí)別特異序列，切割 DNA 催化 DNA中相鄰的 5‘磷酸基和 3’羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，是 DNA切口封合或是 DNA片段連接 ①合成雙鏈 cDNA的第二條鏈 ②缺口平移制作高比活探針 ③ DNA序列分析 ④填補(bǔ) 3’ 末端 ①合成 cDNA ② 代替 DNA聚合酶 I 進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA序列分析 催化多聚核苷酸 5’ 羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針 在 3’ 羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾 切除末端磷酸基 4 第一 限制性核酸內(nèi)切酶 這類(lèi)酶又簡(jiǎn)稱(chēng)為限制性?xún)?nèi)切酶或限制酶 。 是一類(lèi)能夠識(shí)別雙鏈 DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割 DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核苷酸內(nèi)切酶。 5 一、限制性?xún)?nèi)切酶概念的提出 寄主控制的限制（ restriction）與修飾 (modification) 現(xiàn)象： 人們發(fā)現(xiàn)侵染大腸桿菌的噬菌體都存在著一些功能性障礙。即所謂的寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象簡(jiǎn)稱(chēng)（ R/M體系）。 細(xì)菌的 R/M體系類(lèi)似于免疫系統(tǒng)，能辨別自身的 DNA與外來(lái)的 DNA，并能使后者降解掉。 6 為什么生物體產(chǎn)生的限制酶，不會(huì)損失自身的 DNA呢？？？ 7 R/M體系： 寄主是由兩種酶活性配合完成的 一 種是修飾的甲基轉(zhuǎn)移酶 另 一種是核酸內(nèi)切限制酶 8 EcoB核酸酶 和 EcoB甲基化酶 以 λ(k) 噬菌體侵染 9 限制性?xún)?nèi)切酶將侵入細(xì)菌體內(nèi)的 外源DNA切成小片斷。 （ 1）限制（ Restriction） 10 細(xì)菌自身的 DNA堿基被 甲基化酶 甲基化修飾所保護(hù)，不能被
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