50感染量或50組織細(xì)胞感染量id50或tcid50測定法(已修改)
2025-10-11 09:59 本頁面
【正文】 * 50%感染量或 50%組織細(xì)胞感染量 (ID50或 TCID50)測定法 用半數(shù)感染量可估計病毒感染性的強(qiáng)弱及含量，但不能準(zhǔn)確測定感染性病毒顆粒的數(shù)量。 方法是測定病毒能使 50%的組織培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生感染的最小量 。一般是將病毒懸液作 10倍的系列稀釋，分別接種細(xì)胞，經(jīng)一定時間后觀察 CPE、 血細(xì)胞吸附等指標(biāo)，以最高稀釋度能感染 50%細(xì)胞的量為終點。最后用統(tǒng)計方法計算出 50%感染量 (ID50)或 50%組織細(xì)胞感染量 (TCID50或 TCD50) 二 病毒的增殖 （ 一 ） 病毒的增殖方式 病毒的增殖方式是復(fù)制 。 因病毒不具有能獨立進(jìn)行代謝的酶系統(tǒng) ， 因此在細(xì)胞外是處于無活性或靜止?fàn)顟B(tài) 。 只有進(jìn)入活的易感宿主細(xì)胞 ， 由宿主細(xì)胞供給合成病毒核酸與蛋白質(zhì)的原料 ， 如低分子量前體成分 、 能量 、 必要的酶和細(xì)胞器等， 病毒才能增殖 （ 二 ） 病毒復(fù)制周期 1 吸附與穿入 病毒的增殖首先吸附在宿主細(xì)胞后方可穿入 （ 1） 吸附有兩種 ： ① 病毒與細(xì)胞的靜電結(jié)合 病毒和細(xì)胞在生理 pH條件下均帶陰電荷 ，因而可互相排斥 ， 除隨機(jī)的碰撞外 ， 一般較少相互吸引 。 如有陽離子存在 ， 則可促進(jìn)結(jié)合 。但這種結(jié)合是非特異的和可逆的； ② 宿主細(xì)胞表面受體與病毒表面結(jié)構(gòu)成分的特異結(jié)合 ， 這是真正的結(jié)合 （ 2） 病毒的穿入 病毒可通過數(shù)種方式穿入細(xì)胞膜 ， 即吞飲 、 融合和轉(zhuǎn)位： ① 吞飲 即病毒與細(xì)胞表面結(jié)合后內(nèi)凹入細(xì)胞 ， 細(xì)胞膜內(nèi)陷形式類似吞噬泡 ， 病毒原封不動地進(jìn)入細(xì)胞漿內(nèi) 。 無包膜的病毒多以吞飲形式進(jìn)入易感動物細(xì)胞內(nèi)； ② 融合 是指病毒包膜與細(xì)胞膜融合 ， 而將病毒的核衣殼釋放至細(xì)胞漿內(nèi) 病毒體吸附細(xì)胞的過程可在幾分鐘到幾十分鐘內(nèi)完成 2 脫殼 病毒脫去蛋白衣殼后 ,核酸才能發(fā)揮作用 。多數(shù)病毒穿入細(xì)胞之后 ， 隨即由細(xì)胞溶酶體酶的作用 ， 使衣殼蛋白質(zhì)水解 ,露出病毒核酸 。 但痘病毒特殊 ， 分為兩步脫殼 。 先由溶酶體酶作用脫去外殼蛋白質(zhì) ， 病毒核心 (含有內(nèi)層衣殼和核酸 )釋放于細(xì)胞漿中 ， 然后再經(jīng)病毒編碼產(chǎn)生一種脫殼酶 ， 脫去內(nèi)層衣殼方能釋放出核酸 3 生物合成 病毒脫殼之后 ， 接著就進(jìn)入病毒復(fù)制的生物合成階段 ，即病毒利用宿主細(xì)胞提供的低分子物質(zhì)合成大量病毒核酸和結(jié)構(gòu)蛋白 。查在細(xì)胞內(nèi)找不到病毒顆粒 ， 故稱其為隱蔽期 。 各病毒的隱蔽期長短不一 ， 如脊髓灰質(zhì)炎病毒是 34h， 正粘病毒 78h， 副粘病毒 1112h， 腺病毒 1617h。 隱蔽期實則是在病毒基因控制下進(jìn)行病毒核酸和蛋白質(zhì)合成的階段 。 病毒核酸復(fù)制部位因核酸類型不同而異 。 DNA病毒除痘病毒外 ， 都在細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制； RNA病毒除正粘病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒在細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制外 ， 其余都在細(xì)胞漿內(nèi)復(fù)制 由于病毒核酸類型不同 ， 病毒的生物合成過程基本歸為 6類 ， DNA病毒包括雙鏈DNA病毒和單鏈 DNA病毒； RNA病毒包括單正鏈 RNA 病毒 、 單負(fù)鏈 RNA 病毒 、 雙鏈 RNA病毒及逆轉(zhuǎn)錄病毒 (1) 雙鏈 DNA病毒 首先利用宿主核內(nèi)的依賴 DNA的 RNA多聚酶 ，轉(zhuǎn)錄早期 mRNA， 再于胞漿內(nèi)的核糖體轉(zhuǎn)譯成早期蛋白 。 早期蛋白主要包括依賴 DNA的 DNA多聚酶及脫氧胸腺嘧啶激酶 ， 以利用其合成子代 DNA分子 。 再以子代 DNA分子為模板轉(zhuǎn)錄多聚成大量晚期 mRNA， 繼而在胞漿核糖體上轉(zhuǎn)譯出病毒結(jié)構(gòu)蛋白 ， 主要為衣殼蛋白 雙鏈 DNA復(fù)制為半保留復(fù)制形式 。即親代DNA的雙鏈在解鏈酶作用下，解開成為正、負(fù)兩個 DNA單鏈。再分別以這兩條單鏈為模板，在DNA酶的作用下，按照核苷酸堿基配對的規(guī)律，分別合成互補的 DNA (負(fù)鏈或者正鏈 )，為新合成的雙鏈 DNA， 即為子代 DNA。 通過此復(fù)制過程，生成大量與親代結(jié)構(gòu)完全相同的子代 DNA (2)單鏈 DNA病毒 是以親代 DNA作模板 ， 在DNA多聚酶的作用下 ， 產(chǎn)生互補鏈 ， 并與親代DNA鏈形成 177。 dsDNA， 作為復(fù)制中間型 ， 即 DNA RI。 然后再以半保留形式進(jìn)行復(fù)制 (3)正單鏈 RNA病毒 由于該病毒 RNA具有mRNA功能，其 RNA可直接附著于宿主
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