質(zhì)粒dna的抽提、純化與檢測(已修改)
2025-05-26 23:02 本頁面
【正文】 YL1 分子生物學(xué)實驗（綜合性） 質(zhì)粒 DNA的抽提、酶切及電泳鑒定 常規(guī) PCR技術(shù) 感受態(tài)細胞的制備及重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 真核細胞基因組 DNA的分離、純化與檢測 YL2 質(zhì)粒 DNA的抽提、酶切及 電泳鑒定 實驗 實驗安排 上午：質(zhì)粒 DNA 的提取與純化 中午： 質(zhì)粒 DNA 的酶切 下午： 電泳鑒定 ?質(zhì)粒 (plasmid)：是細菌、酵母菌和放線菌中自然存在的獨立于染色體外、具有復(fù)制能力的小分子共價閉合環(huán)狀雙鏈 DNA。 ?現(xiàn)在常用的質(zhì)粒大多數(shù)是經(jīng)過改造或人工構(gòu)建的，常含抗生素抗性基因。 ?是重組 DNA技術(shù)中重要的載體。 質(zhì)粒 作為載體的質(zhì)粒： ? 多克隆位點 ? 選擇標(biāo)記 ? 容納較大的外源 DNA 質(zhì)粒的特性： ? 相對獨立性 ? 獨立的復(fù)制單位 ? 賦予宿主細胞一些表型 ? 與宿主菌染色體 DNA不同 質(zhì)粒 提取質(zhì)粒 DNA的 目的與意義 ?基因載體 /基因克隆 /基因工程： 在基因工程中，常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體。人工構(gòu)建的質(zhì)?？梢约喾N有用的特征于一體，如含多種單一酶切位點、抗生素耐藥性等。 如何獲得批量的純化質(zhì)粒 DNA分子？ （一）載體的制備 ： 質(zhì)粒 DNA的提取與純化 提取方法概述 基本步驟 培養(yǎng)細菌使質(zhì)粒擴增 收集和裂解細菌 分離、純化質(zhì)粒 常用方法 堿裂解法 煮沸裂解 試劑盒法 氯化銫密度梯度離心法 堿裂解法分離純化質(zhì)粒 DNA 基本原理： 利用質(zhì)粒 DNA與染色質(zhì) DNA變性與復(fù)性的 差異 。 當(dāng)菌體在 NaOH和 SDS溶液中裂解時 ， 蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性；當(dāng)加入中和液后 ， 質(zhì)粒 DNA分子能夠迅速復(fù)性 ， 呈溶解狀態(tài) ， 離心時留在上清中；蛋白質(zhì)與染色體 DNA不復(fù)性而呈絮狀 ， 離心時可沉淀下來 。 原理示意圖 溶液 Ⅰ ： 50mmol/L葡萄糖 , （ ）
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