20xx年醫(yī)學專題—第四章-動物干細胞-文庫吧
2024-11-16 01:00 本頁面
【正文】 殖(zēngzh237。)特性和多能性。 常用飼養(yǎng)層細胞為成纖維細胞（如STO成纖維細胞系）、子宮內(nèi)皮細胞、3T3細胞株等。 為了阻斷飼養(yǎng)層細胞的分裂，而不影響其分泌蛋白的產(chǎn)生，通常采用γ射線或絲裂霉素C處理之。,第十七頁，共七十四頁。,培養(yǎng)基的準備： 用DMEM（高糖）培養(yǎng)液，其中胎牛血清的濃度和質(zhì)量很重要，還要加非必須(b236。xū)氨基酸；β巰基乙醇。 常采用添加LIF等抑制ESC的分化潛能；添加EGF等生長因子來促進ESC的增殖。,第十八頁，共七十四頁。,LIF抑止(y236。zhǐ)胚胎干細胞分化的信號通路,LIF 干細胞表面的LIF受體和gp130蛋白形成異二聚體 激活JAK酪氨酸激酶系統(tǒng) 激活MAP激酶ERK級聯(lián)反應(yīng)和STAT3蛋白 STAT3形成同型二聚體入核 激活核內(nèi)靶基因轉(zhuǎn)錄 表達(biǎod225。)相應(yīng)蛋白抑止ESC的分化,第十九頁，共七十四頁。,2. 胚胎的采集 一般囊胚期胚胎或后桑葚胚。 3. ICM的獲取 1）直接分離法：囊胚于飼養(yǎng)層上自行(z236。x237。ng)發(fā)育成孵化囊胚，待ICM擴大增殖時挑取?；蚴褂面溍沟鞍酌柑幚鞿P，獲得裸胚培養(yǎng)。 2）免疫分離法：鏈霉蛋白酶去除囊胚晚期胚泡ZP，依次轉(zhuǎn)移至補體滅活和未滅活的抗血清中，去除滋胚層細胞后，吸取ICM，移至飼養(yǎng)層培養(yǎng)。,第二十頁，共七十四頁。,4. ICM的離散(l237。s224。n) 胰蛋白酶消化即可離散ICM。 5. 胚胎干細胞建系,第二十一頁，共七十四頁。,三、胚胎(pēitāi)干細胞的應(yīng)用,第二十二頁，共七十四頁。,第二十三頁，共七十四頁。,第二十四頁，共七十四頁。,第三節(jié)、胚胎(pēitāi)干細胞的生物學特性與鑒定方法,一、生物學特性 增殖與分化特征： 永生化(immortal)； 能維持穩(wěn)定的正常的二倍體染色體結(jié)構(gòu)； 有穩(wěn)定的發(fā)育潛能，能被誘導(y242。udǎo)增殖或分化； 能參與胎兒所有組織的發(fā)育過程；,第二十五頁，共七十四頁。,形態(tài)特征(t232。zhēng) 體積小、核大，有一個或多個核仁； 胚胎干細胞克隆緊密堆積，細胞之間無明顯的界限，細胞克隆有一定形狀規(guī)律。 生化特征 具有堿性磷酸酶和端粒酶活性； 表達SSEASSEATRA160等表面標志； 表達OCT4蛋白；,第二十六頁，共七十四頁。,第二十七頁，共七十四頁。,人胚胎干細胞的表面(biǎomi224。n)標志,第二十八頁，共七十四頁。,Otc4基因(jīyīn),Otc4基因被認為在整個卵子生成和囊胚附殖前以及早期外胚層中都表達，是受精卵全能性的關(guān)鍵。 Otc4基因只能在胚胎中才能得到完全表達，而在成體(ch233。nɡ tǐ)動物體細胞中的表達基本上被關(guān)閉。這就意味著克隆人技術(shù)的第一步就存在很大問題。所以O(shè)tc4也被稱為克隆人終結(jié)者。,第二十九頁，共七十四頁。,二、胚胎干細胞的鑒定(ji224。nd236。ng)方法,1. 形態(tài)(x237。ngt224。i)鑒定： 核質(zhì)比大，體積小，細胞集落小鼠呈鳥巢狀，牛、豬等呈饅頭狀，人呈扁平、松散聚合體。 2. 核型分析： 二倍體核型，染色體受損情況等。,第三十頁，共七十四頁。,3. ESC特異性表面抗原表達的鑒定： 小鼠ESC以SSEA1為主，人以SSEA
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