20xx年醫(yī)學(xué)專題—第七章-細(xì)胞融合與體細(xì)胞雜交61-文庫吧
2024-11-16 00:29 本頁面
【正文】 個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。 對于植物也叫“原生質(zhì)體融合”。親本細(xì)胞是體 細(xì)胞，也叫“體細(xì)胞雜交（somatic cell hybridization）”。,由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間 細(xì)胞(x236。bāo)的融合，因此細(xì)胞(x236。bāo)融合技術(shù)在創(chuàng)造新細(xì)胞、 培育新品種方面意義重大。,第十一頁，共六十二頁。,,二 細(xì)胞融合的分類(fēn l232。i),1.材料：原生質(zhì)體（去除了(ch le)細(xì)胞壁的裸露的細(xì)胞）、動(dòng)物細(xì)胞,2.從親本(qīn běn)來源：,（1）同核體（Homokaryon）：基因型相同的細(xì)胞融合成的融 合細(xì)胞稱為。,（2）異核體（Heterokaryon）：來自不同基因型的融合細(xì)胞 。,3.從融合效果：,（1）對稱融合（Symmetric fusion）：兩個(gè)完整的細(xì)胞間的融 合。,（2）不對稱融合（Asymmetric fusion）：利用物理或化學(xué)方 法使某親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再與另外一個(gè)完整細(xì)胞進(jìn)行 融合,第十二頁，共六十二頁。,,三 發(fā)展(fāzhǎn)歷史,自發(fā)融合現(xiàn)象(xi224。nxi224。ng)最初在動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。1858年發(fā)現(xiàn) 正常組織、發(fā)炎組織以及腫瘤組織中的多核細(xì)胞情 況。動(dòng)物體內(nèi)的破骨細(xì)胞也是自發(fā)融合形成的多核 細(xì)胞。,1962年日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)一種(yī zhǒnɡ)叫日本血凝性病毒(HVJ) 能引起艾氏腹水瘤細(xì)胞融合成多核細(xì)胞的現(xiàn)象。 20世紀(jì)70年代初，華裔加籍科學(xué)家高國楠發(fā)現(xiàn)聚乙 二醇(PEG)能促使植物原生質(zhì)體融合，開拓了植物 細(xì)胞融合的研究。,20世紀(jì)80年代，齊默曼（Zimmerman）等建立電場 誘導(dǎo)細(xì)胞融合方法。,第十三頁，共六十二頁。,,四 細(xì)胞融合原理(yu225。nlǐ) 1細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能,細(xì)胞膜磷脂(l237。n zhī)分子,擾動(dòng)出現(xiàn)(chūxi224。n)通道,——細(xì)胞橋,第十四頁，共六十二頁。,主要(zhǔy224。o)環(huán)節(jié),（1）親本選擇（單細(xì)胞或原生質(zhì)體制備） （2）兩原生質(zhì)體或細(xì)胞互相靠近，粘附 （3）質(zhì)膜融合(r243。ngh233。)形成細(xì)胞橋 （4）胞質(zhì)滲透,（5）細(xì)胞核融合(r243。ngh233。),（6）融合細(xì)胞篩選,第十五頁，共六十二頁。,,原生質(zhì)體及其制備(zh236。b232。i),（1）定義(d236。ngy236。)：,去除(q249。 ch)細(xì)胞壁后裸露的細(xì)胞稱之為原生質(zhì)體 （protoplast）。 （2）特點(diǎn)：,無細(xì)胞壁，可以方便地進(jìn)行遺傳操作、人工誘變 、細(xì)胞器轉(zhuǎn)移、細(xì)胞融合等操作。 具有全能性，能再生細(xì)胞壁。,第十六頁，共六十二頁。,,（ 3）制備與純化(chn hu224。),酶解法(jiě fǎ)的建立,1960年，英國科金第一次采用 酶方法(fāngfǎ)從番茄幼苗大量制備出 原生質(zhì)體。使植物細(xì)胞融合技 術(shù)得以建立。,植物細(xì)胞的細(xì)胞壁主要成分是 纖維素（纖維素微纖絲,Cellulose microfibrils ）、 果膠（pectin）、多糖 （glycan）。,果膠酶、纖維素酶等處理植物 組織，可以破壞胞間層和去掉 細(xì)胞的纖維素外壁，得到游離 的裸露原生質(zhì)體。,第十七頁，共六十二頁。,,4 分離(fēnl237。)、鑒定與活力分析,（1）分離(fēnl237。),飄浮法：常用的飄浮劑有蔗糖、Percoll、Ficoll等。 離心法：低速(dī s249。)離心，收集沉淀。 （2）鑒定與活力分析,低滲爆破：爆破后是無形的。滲透壓調(diào)節(jié)劑：葡萄糖、甘 露醇、山梨醇等。,染色發(fā)法：有活力的原生質(zhì)體吸收不同染料顯示與死亡細(xì) 胞不同的顏色來分析。FDA（二乙酸熒光素）能自由地穿 越細(xì)胞質(zhì)膜，在活細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)DA被酯酶裂解即發(fā)熒光（熒 光素），由于熒光素不能自由通過質(zhì)膜，因而可以在熒光 顯微鏡下通過具熒光的細(xì)胞的觀察確定細(xì)胞活性。,第十八頁，共六十二頁。,,關(guān)鍵(guānji224。n)： 細(xì)胞核的融合,若是沒發(fā)生細(xì)胞核的融合，僅發(fā) 生了細(xì)胞質(zhì)的融合，則可能(kěn233。ng)成為 嵌合細(xì)
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