20xx人教版高中生物選修一52《多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段》-文庫吧
2024-11-19 14:55 本頁面
【正文】 3’端開始，將配對的脫氧核苷酸連接起來。 后續(xù)加工： DNA 聚合酶 I將引物切去，并合成空缺處的 DNA單鏈，再由 DNA連接酶將不連續(xù)的 DNA子鏈連接起來（半不連續(xù)合成。先導(dǎo)鏈，滯后鏈） 子鏈合成特點(diǎn)：不能從頭合成；合成方向?yàn)椤?5’→ 3’合成”。 感悟生命的神秘： DNA 聚合酶不但能夠催化磷酸二酯鍵的形成，還具 有校對功能。它在每引入一個(gè)核苷酸后都要復(fù)查一次，只有堿基配對無誤后才能繼續(xù)往下聚合，它不能從頭合成。 RNA聚合酶沒有校對功能，因此 RNA的合成不需要引物，而是從頭合成的，它的錯(cuò)配可能性較大，在 RNA引物完成功能后即被 DNA聚合酶 I刪去，代之以高保真的 DNA鏈。 ［思考］ DNA分子能準(zhǔn)確復(fù)制的原因有哪些？ DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)提供模板；堿基互補(bǔ)配對； DNA聚合酶的復(fù)查功能。 ［思考］細(xì)胞內(nèi)哪些物質(zhì)是從頭合成的？ RNA合成、蛋白質(zhì)合成。 1． 3DNA分子復(fù)制的人工控制 解開螺旋：在 80～ 100℃時(shí)， DNA雙螺旋打開 ，形成兩條 DNA單鏈，稱為變性。 恢復(fù)螺旋：在 50℃左右時(shí)，兩條 DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為復(fù)性。 復(fù)制條件： 緩沖液 ,DNA模板 ,四種脫氧核苷酸 ,熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 ,兩種引物。 反應(yīng)場所： PCR儀（自動溫度周期性調(diào)節(jié)）。 ［思考］緩沖液相當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的什么成分？（核基質(zhì)） 4． PCR的反應(yīng)過程 變性：在 95℃時(shí) DNA解旋 復(fù)性：在 50℃時(shí)引物與 DNA單鏈結(jié)合 延伸：在 72℃時(shí)合成 DNA子鏈（兩個(gè)引物間的序列） 2．實(shí)驗(yàn)操作 2． 1 PCR反應(yīng)體系：緩沖液、 DNA模板，四種脫氧核苷酸原 料、熱穩(wěn)定 DNA聚合酶、兩種 RNA引物，水 2． 2 實(shí)驗(yàn)操作步驟 2． 3 按照 PCR反應(yīng)體系配方配制反應(yīng)液； （ 2）將 PCR反應(yīng)體系 50μ L用微量移液器轉(zhuǎn)移到微量離心管（ ）中； （ 3）將微量離心管放到 PCR儀中； （ 4）設(shè)置 PCR儀的工作參數(shù)。 （ 5） DNA在 PCR儀中大量擴(kuò)增。 2． 4 水浴法：將微型離心管依次在 95℃、 55℃、 72℃的恒溫水浴鍋中循環(huán)處理相應(yīng)時(shí)間。 3．實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) 3． 1避免外源 DNA污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。 3． 2緩沖液和酶分裝成小份，－ 20℃低溫保 存
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