20xx人教版高中生物選修一52《多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段》-預(yù)覽頁
【正文】 NA分子能準(zhǔn)確復(fù)制的原因有哪些？ DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)提供模板；堿基互補(bǔ)配對(duì)； DNA聚合酶的復(fù)查功能。 復(fù)制條件： 緩沖液 ,DNA模板 ,四種脫氧核苷酸 ,熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 ,兩種引物。 2． 4 水浴法：將微型離心管依次在 95℃、 55℃、 72℃的恒溫水浴鍋中循環(huán)處理相應(yīng)時(shí)間。 3． 4混勻后離心處理，使反應(yīng)液集中在離心管底部。L蒸餾水添加到比色杯中，在 260nm處將分光光度計(jì)調(diào)整讀數(shù)為零。 答案： B 例 2 關(guān)于 DNA的復(fù)制，下列敘述正確的是（ ） A. DNA聚合酶不能從頭開始合成 DNA，只能從 5’端延伸 DNA鏈 B. DNA復(fù)制不需要引物 C. 引物與 DNA母鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行結(jié)合 D. DNA的合成方向總是從子鏈的 3’端向 5’端延伸 解析：由于 DNA聚合酶不能從頭開始合成 DNA， 只能從引物的 3’端即復(fù)制方向由 3’端向 5’端延伸；由于 DNA分子是反向平行的，子鏈?zhǔn)且罁?jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在 DNA聚合酶作用下合成的，其合成方向是從子鏈 5’端向 3’端延伸。對(duì)于 PCR反應(yīng)過程的教學(xué)，應(yīng)以讀圖識(shí)圖為主。 九、【 資料袋】 免疫 PCR 免疫 PCR(immunoPCR)是新近建立的一種靈敏、特異的抗原檢測(cè)系統(tǒng) .它利用抗原 抗體反應(yīng)的特異性和 PCR擴(kuò)增反應(yīng)的極高靈敏性來檢測(cè)抗原，尤其適用于極微量抗原的檢測(cè) . 免疫 PCR 試驗(yàn)的主要步驟有三個(gè) :①抗原 抗體反應(yīng)，②與嵌合連接分子結(jié)合，③ PCR擴(kuò)增嵌合連接分子中的 DNA(一般為質(zhì)粒 DNA).該技術(shù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是嵌合連接分子的制備 .在免疫 PCR 中，嵌合連接分子起著橋梁作用，它有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，一個(gè)與抗原抗體復(fù)合物中的抗體結(jié)合，一個(gè)與質(zhì)粒 DNA結(jié)合，其基本原理與 ELISA和免疫酶染色相似，不同之處在于其中的標(biāo)記物不是酶而是質(zhì)粒 DNA，在操作反應(yīng)中形成抗原抗體 連接分子 DNA 復(fù)合物，通過 PCR擴(kuò)增 DNA來判斷是否存在特異性抗原 . 免疫 PCR優(yōu)點(diǎn)為 :①特異性較強(qiáng)，因?yàn)樗⒃诳乖贵w特異性反應(yīng)的基礎(chǔ)上 .②敏感度高， PCR具有驚人的擴(kuò)增能力，免疫 PCR比 ELISA敏感度高 105倍以上，可用于單個(gè)抗原的檢測(cè) .③操作簡(jiǎn)便， PCR擴(kuò)增質(zhì)粒 DNA比擴(kuò)增靶基因容易得多，一般實(shí)驗(yàn)室均能進(jìn)行 .
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