實(shí)驗(yàn)一、16srrna基因的pcr擴(kuò)增、電泳及系統(tǒng)發(fā)育分析-文庫吧
2025-02-09 11:59 本頁面
【正文】 網(wǎng)孔狀的電泳介質(zhì)，密度由瓊脂糖的濃度決定。 瓊脂糖凝膠分辨 DNA片段的能力 瓊脂糖凝膠分辨 DNA片段的范圍 : 凝膠濃度 線形 DNA的最佳分辨范圍（ bp） % 1,000～ 30,000 % 800～ 12,000 % 500～ 10,000 % 400～ 7,000 % 200～ 3,000 % 50～ 2,000 瓊脂糖 DNA分子在電泳過程中遷移的距離受以下幾個(gè)因素的影響： 核酸 分子量的大小 分子狀態(tài) 物理 電壓 緩沖液 溫度 電泳指示劑：溴芬蘭，距邊緣 1cm左右停止電泳。 電泳染色劑：溴化乙錠 (ethidium bromide,簡(jiǎn)稱 EtBr)， 扁平染料， 嵌到 DNA或 RNA分子的堿基之間，借助紫外燈觀察。 DNA Marker 800bp 操 作 步 驟 成 分 貯液濃度 使用量 (20μl體系 ) 水 —— 14μl 10 GC Buffer Mg2+ Plus 2μl dNTPs 16Sp1 10pmol/μl 1 μl 16S p2 10pmol/μl 1μl 基因組 DNA 100μg/ml 1μl Taq酶 5U/μl 循環(huán)次數(shù) 反應(yīng)條件 1 95℃ （ 10min） 30 94℃ ； 30s 58℃ ； 1min 72℃ ； 1min30s 1 72℃ ； 10min 1 72℃ (10min) 操 作 步 驟 (1) 稱取瓊脂糖，用適當(dāng)?shù)碾娪揪彌_液 (常用 1 TAE)配成所需濃度的膠； 10 TAE 緩沖液配制： Tris乙酸； EDTA， (2) 置微波爐中加熱煮沸，直至瓊脂糖完全溶解； (3) 按照每 20ml膠加入 1181。l Goldview/20ml； (4) 凝膠溶液冷卻至 50℃ 左右，倒入電泳膠盤，避免出現(xiàn)氣泡，室溫放置，至膠凝固； (5) 小心拔出梳子，將膠盤放到有 1 TAE 緩沖液的水平電泳槽中； (6) 樣品中加入 1/5 體積的 6 loading buffer，混勻，用移液器小心加到點(diǎn)樣孔中，以穩(wěn)定電壓 (45V/cm) 電泳； 6 加樣指示劑配方 :% 溴酚藍(lán) 。40%(W/V) 蔗糖水溶液； (7) 取出凝膠，紫外燈下
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