實驗一、16srrna基因的pcr擴(kuò)增、電泳及系統(tǒng)發(fā)育分析(文件)
【正文】 /μl 循環(huán)次數(shù) 反應(yīng)條件 1 95℃ （ 10min） 30 94℃ ； 30s 58℃ ； 1min 72℃ ； 1min30s 1 72℃ ； 10min 1 72℃ (10min) 操 作 步 驟 (1) 稱取瓊脂糖，用適當(dāng)?shù)碾娪揪彌_液 (常用 1 TAE)配成所需濃度的膠； 10 TAE 緩沖液配制： Tris乙酸； EDTA， (2) 置微波爐中加熱煮沸，直至瓊脂糖完全溶解； (3) 按照每 20ml膠加入 1181。方向：負(fù) →正 種類： 水平 垂直 瓊脂糖 聚丙烯酰胺 普通 DNA RNA 小分子量 核酸 二、瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖：線性多糖聚合物、從紅色海藻產(chǎn)物瓊脂中提取而來。 一個標(biāo)準(zhǔn)的 PCR過程 核酸的凝膠電泳 基本原理 當(dāng)一種分子被放置在電場中時，它們就會以一定的速度移向適當(dāng)?shù)碾姌O。 5 180。 5180。 退火 引物 2 30個循環(huán)： 230 目標(biāo) DNA片段達(dá)106107 變性－退火－延伸 5 180。 底物 延伸 5 180。 目的基因 變性 加熱 5 180。 5180。 5180。 待擴(kuò)增 DNA區(qū)域 3180。馬玉超 北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 辦公地點(diǎn)：生物樓 117；電話： 62336016； Email: 現(xiàn)代微生物學(xué)實驗技術(shù) 實 驗 內(nèi) 容 ?16S rRNA基因的 PCR擴(kuò)增、電泳及系統(tǒng)發(fā)育分析 ?染色體步移法克隆已知序列的側(cè)翼序列 ? 大腸桿菌 β半乳糖苷酶的誘導(dǎo)表達(dá) ? 利用 SDSPAGE分析融合蛋白的可溶性 ? 綠色糖單胞菌的發(fā)酵及孢外酶的提取 16S rRNA基因的 PCR擴(kuò)增、電泳 及系統(tǒng)發(fā)育分析 竇 桂 銘 實 驗 目 的 PCR的原理，增強(qiáng)對 PCR重要性的認(rèn)識； ，為將來課題研究奠定基礎(chǔ)。 94℃ 5 min 5180。 聚合 3180。 3180。 5 180。 5 180。 5180。 5 180。 5 180。 這種電泳分子在電場作用下的遷移速度 —— 電泳的遷移率。 加熱 → 凝固：網(wǎng)孔狀的電泳介質(zhì)，密度由瓊脂糖的濃度決定。l Goldview/20ml； (4) 凝膠溶液冷卻至 50℃ 左右，倒入電泳膠盤，避免出現(xiàn)氣泡，室溫放置，至膠凝固； (5) 小心拔出梳子，將膠盤放到有 1 TAE 緩沖液的水平電泳槽中； (6) 樣品中加入 1/5 體積的 6 loading buffer，混勻，用移液器小心加到點(diǎn)樣孔中，以穩(wěn)定電壓 (45V/cm) 電泳； 6 加樣指示劑配方 :% 溴酚藍(lán) 。 , March 9, 2023 ? 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 :26:0819:26:08March 9, 2023 ? 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山
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