細胞工程-動物細胞培養(yǎng)基本技術與原理-文庫吧
2025-01-15 16:46 本頁面
【正文】 ）動物細胞的分裂周期長 動物細胞分裂周期一般為 12～ 48小時，它不僅隨細胞種屬的不同而有差異，即使是同一種屬，不同部位的細胞所需的時間也不同。此外，培養(yǎng)條件如溫度、pH、培養(yǎng)基的成分等，也會影響分裂周期的長短。 2）接觸抑制 (contact inhibition)現(xiàn)象 除少數(shù)懸浮培養(yǎng)細胞外，大多數(shù)正常二倍體細胞的生長都需要在一定的基質（如玻璃、塑料等）上貼附，伸展后才能增殖。當細胞在基質上分裂增殖，逐漸匯合成片即每個細胞與其周圍的細胞相互接觸時，細胞就停止增殖，即細胞密度不再增加，這一現(xiàn)象稱之為接觸抑制或密度依賴抑制現(xiàn)象。 3）有限細胞系和永久細胞系 動物細胞離體培養(yǎng)起始物 原代培養(yǎng) （ primary culture） 經(jīng)繼代培養(yǎng)后即成為 有限細胞系 (finite cell line)。有限細胞系即使培養(yǎng)條件均能滿足細胞繁殖生長，它們也只能在有限的時間內生存，一般經(jīng)過 30~50世代后細胞將逐漸死亡。 “代”： 繼代次數(shù)和存活時間的長短因細胞來源的年齡和種族不同而有差異。年齡越大繼代次數(shù)越少。人胚成纖維細胞約可以培養(yǎng) 50代，而成年人的成纖維細胞則不能繼代 50次，同樣是成纖維細胞，取自雞胚的成纖維細胞可繼代培養(yǎng) 30代，而小鼠的只能培養(yǎng) 8代。 大多數(shù)細胞系在有限的代數(shù)內以不變的形式增殖，當超過有限世代后，它們可能有兩種情況：一是衰老死亡，二是發(fā)育成 永久細胞系 或稱連續(xù)細胞系。有限細胞系轉換成永久細胞系的過度期稱為轉換期 (crisis)，其轉換過程在動物細胞培養(yǎng)中稱為體外轉化 (in vitro transformation)。 永久細胞系有如下特征： 細胞形態(tài)變化，如細胞變小，黏附性減少，具有較高的核質比； 生長速率增加，倍增時間縮短；對血清的依賴性減??； 貼壁依賴性降低；細胞異倍體和非整倍體增加，細胞接種到體內后，生癌率上升。永久細胞系的建立是動物細胞規(guī)?；囵B(yǎng)的前體 。 4）動物細胞的環(huán)境敏感性 動物細胞與微生物和植物細胞相比，其培養(yǎng)難度要大一些，其主要原因是動物細胞只有細胞膜，而沒有細胞壁的保護。 動物相比對培養(yǎng)環(huán)境十分敏感，一切影響細胞膜變形的因素都會影響動物細胞存活。 動物細胞培養(yǎng)對營養(yǎng)條件的要求也十分復雜。 三、動物細胞的環(huán)境要求 1. 動物細胞培養(yǎng)的環(huán)境要求 1）無污染環(huán)境 2）溫度 昆蟲細胞培養(yǎng)溫度一般是 25～ 28℃ 哺乳動物細胞的培養(yǎng)溫度一般是 37℃ 。 總體上講，動物細胞忍受低溫的能力比忍受高溫的能力強。如哺乳動物細胞在 45℃ 下只能存活 1小時，但在 25℃ 條件下仍然能慢速生長，并維持長時間不死，甚至在 4℃ 下數(shù)小時后，再置于適宜溫度下細胞仍然可以正常生長。液氮凍存。 3） pH 動物細胞培養(yǎng)適宜的 pH一般在 ，低于 或高于 ，嚴重時會導致細胞死亡。 培養(yǎng)細胞對 pH的要求因培養(yǎng)時間長短有關，一般原代細胞要求較嚴格，而永久細胞系對 pH具有較強的忍耐性。 4）氣體環(huán)境及溶氧 一般細胞在培養(yǎng)初期要求較低的溶氧水平，而在對數(shù)生長期或培養(yǎng)后期，對溶氧水平要求增加，如果供氧不足，將導致細胞缺氧而死亡。 除了氧氣供應外，還應注意培養(yǎng)基的氧氣和 CO2的平衡。 5）滲透壓 動物細胞培養(yǎng)滲透壓包括兩個方面的問題： 培養(yǎng)基的滲透壓維持 細胞體內的滲透壓維持 大多數(shù)動物細胞對滲透壓的忍耐程度較強，只要培養(yǎng)基的滲透壓變化不是很劇烈，一般對培養(yǎng)物不會造成致命傷害。動物細胞滲透壓的維持一般采用平衡鹽溶液。 四 、 動物細胞培養(yǎng) 基本概念和基本步驟 : 取材分離和組織消化 細胞計數(shù) 常用培養(yǎng)法 細胞的常規(guī)檢查 細胞系與克隆 動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng) 細胞的凍存與復蘇 一、基本概念（ general concept）： 細胞培養(yǎng)（ cell culture）： 將動物組織或細胞分散成單個細胞，在模擬機體內的生長環(huán)境條件下，使其在體外環(huán)境繼續(xù)生長增殖的過程。 原代（初代）培養(yǎng) ：指將機體取出的組織或細胞進行初次培養(yǎng)的過程。原代培養(yǎng)的細胞大約增殖 10代左右，稱為原代細胞。 傳代（繼代）培養(yǎng) ：從原代培養(yǎng)的細胞繼續(xù)轉接培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。 二、取材、分離和組織消化 (to draw the materials from tissue， separation ， digestion ) （一）取材 ——獲取組織 原則上各種動物組織都可進行體外培養(yǎng)，而實際上幼齡組織（尤其 是胚胎組織）比老齡組織容易培養(yǎng)、分化程度低的比分化程度高的 容易培養(yǎng)、腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。 取材前要對所取組織的各種情況進行詳細記錄； 所用器皿用前嚴格消毒滅菌，取材時嚴格無菌操作。 取材方法 : 處死動物 → 取出組織塊，放入小燒杯中 → 用尖嘴眼科剪刀 將組織塊剪碎（ 1mm3），用吸管吸取 Hanks液沖下剪刀上的碎 塊，補加 3~5ml Hanks液，用吸管輕輕吹打； → 低速離心，棄去上 清液，留下組織塊。（也可用手術刀片將組織塊切碎，優(yōu)點：對細 胞損傷較小，缺點是操作
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1