【正文】 4．場 曲 一個平面的物體通過透鏡成像后，雖然像平面上任意一點(diǎn)仍然是清晰的，但所成的像不再是一個平面，而成了一彎曲的面，這就是場曲。 5．畸 變 (distortion) 由于像平面上各處放大率不同引起的成像缺陷稱為畸變 。 畸變的原因是由于透鏡邊緣與透鏡近軸的放大率不同而引起的。 如果離光軸越遠(yuǎn)處放大率越大，則像的外部線段將比中間線段長，結(jié)果形成了枕形畸變，這種畸變稱為正畸變。 反之則形成邊緣放大率小而近軸放大率大的桶形畸變，稱為負(fù)畸變 。 透 鏡 的 畸 變 (二 )、 色 差 色差 (chromatic aberration )是一種由白光或復(fù)色光經(jīng)透鏡成像時，會因各種色光存在著光程差而造成顏色不同、位置不重合、大小不一致的不同成像效果，從而造成像和物的較大失真。 透鏡的色差 透鏡的軸向色差（Ａ）和垂軸色差（Ｂ） Ａ B 五、光學(xué)顯微鏡的不足之處 ： ? 2022? ： ? ?m （可見光照明） ： ? ?m （要求金相準(zhǔn)備） 第二節(jié) 光學(xué)顯微鏡的分類及其應(yīng)用 一 、雙目生物顯微鏡 二 、熒光顯微鏡 三 、相襯顯微鏡 四 、倒置顯微鏡 五 、暗場顯微鏡 六 、紫外光顯微鏡 七 、偏光顯微鏡 八 、激光掃描共聚焦顯微鏡 九 、干涉相襯顯微鏡 十 、近場掃描光學(xué)顯微鏡 一、雙 目 生 物 顯 微 鏡 雙目顯微鏡 (binocular microscope)的結(jié)構(gòu)是利用一組復(fù)合棱鏡把透過物鏡后的光束分成強(qiáng)度相同的兩束而形成兩個中間像，分別再由左右目鏡放大。來自物鏡的光線經(jīng)棱鏡組分光成兩束平行光束，進(jìn)入目鏡，雙目顯微鏡必須滿足分光后兩束光的光程必須相同和兩束光的光強(qiáng)度大小一致這兩個基本要求。 目鏡 物鏡 聚光器 光源 一、雙 目 生 物 顯 微 鏡 二、熒 光 顯 微 鏡 熒光顯微鏡 (fluorescence microscopy)是以紫外線為光源來激發(fā)生物標(biāo)本中的熒光物質(zhì)，產(chǎn)生能觀察到各種顏色熒光的一種光學(xué)顯微鏡。利用它可研究熒光物質(zhì)在組織和細(xì)胞內(nèi)的分布。 為防止紫外線進(jìn)入物鏡，可以采用暗視場照明。 熒光（ Fluorescence）： 細(xì)胞中的某些物質(zhì)（如葉綠素）經(jīng)紫外線照射后能發(fā)出可見光線，稱為熒光。 自發(fā)熒光：由細(xì)胞本身存在的物質(zhì)經(jīng)紫外線照射后發(fā)出的熒光。 誘發(fā)熒光：一些細(xì)胞成分本身經(jīng)紫外線照射后不發(fā)熒光，但用熒光染料（酸性品紅、甲基綠、吖叮橙等熒光色素）進(jìn)行活體染色或固定后切片染色，就能在熒光鏡下看見熒光，這種熒光叫誘發(fā)熒光。 二、熒 光 顯 微 鏡 熒 光 顯 微 鏡 的 種 類 A 透射式 B 落射式 熒 光 顯 微 鏡 的 主 要 部 件 透射式 ? 汞燈光源 ? 激發(fā)濾色鏡 ? 暗場聚光鏡 ? 吸收濾色鏡 落射式 ? 汞燈光源 ? 激發(fā)濾色鏡 ? 分色鏡 ? 吸收濾色鏡 吸收濾色鏡 暗場聚光鏡 激發(fā)濾色鏡 汞燈箱 透 射 熒 光 顯 微 鏡 的 構(gòu) 造 落 射 熒 光 顯 微 鏡 的 構(gòu) 造 吸收濾色鏡 激發(fā)濾色鏡 分色鏡 汞燈 紫外線保護(hù)罩 孔徑光欄 （ FS） 視場光欄 （ AS） 目鏡 吸收濾色鏡 物鏡 暗場聚光鏡 激發(fā)濾色鏡 汞燈 透 射 熒 光 顯 微 鏡 原 理 落 射 熒 光 顯 微 鏡 原 理 三、相 襯 顯 微 鏡 光線只有通過染色標(biāo)本時其波長、振幅發(fā)生變化，人眼才能看見。 活細(xì)胞和未染色的標(biāo)本由于光的波長和振幅不發(fā)生變化，人眼看不到，但其相位有變化，因此利用光的干涉和衍射效應(yīng)把透過標(biāo)本不同區(qū)域的光波光程差轉(zhuǎn)變成振幅差，使細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間呈現(xiàn)清晰可見的明暗對比。 相襯顯微鏡比普通光學(xué)顯微鏡多了 2個部件： 在聚光器上增加一個環(huán)形光闌； 在物鏡后焦面增加一個相板，相板上有一個環(huán)形區(qū)，通過環(huán)形區(qū)的光比從其它區(qū)域透過的光超前或滯后 1/4λ，這樣就使通過標(biāo)本不同區(qū)域光波的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹睢? 三、相 襯 顯 微 鏡 相襯顯微鏡照明原理 光通過標(biāo)本致密區(qū)時發(fā)生衍射，產(chǎn)生偏折光，相位和未受影響的直射光相比被推遲了 1/4λ。只有未發(fā)生偏折的的直射光可通過相位板的環(huán)形區(qū)，其它的偏折光在物鏡的后焦面上產(chǎn)生了一個與通過相位板的環(huán)形區(qū)的光不同的 1/4λ的光程差。兩組光在平面上成像。 三、相 襯 顯 微 鏡 如相板的環(huán)形區(qū)使直射光超前 1/4λ，加上開始直射光超前的 1/4λ，直射光共超前 1/2 λ，直射光和偏折光疊加形成的合成波振幅減少，產(chǎn)生暗反差。 如相板的環(huán)形區(qū)使直射光滯后 1/4λ，加上開始直射光超前的 1/4λ，兩者相抵直射光不發(fā)生變化，直射光和偏折光無相位變化，形成的合成波振幅增加，產(chǎn)生明反差。 三、相 襯 顯 微 鏡 四、倒 置 顯 微 鏡 倒置顯微鏡 (Inverted Microscope)的組成和普通顯微鏡一樣，只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺之下，后者在載物臺之上，用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，具有相差物鏡。 倒置顯微鏡 五、暗 場 顯 微 鏡 暗視野顯微鏡（ dark field microscope）的聚光鏡中央有檔光片，使照明光線不直接進(jìn)入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至 4nm~200nm的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高 50倍。 暗視野照明方式 六、紫 外 光 顯 微 鏡 使用紫外光源可以明顯提高顯微鏡的分辨率，對于生物樣品使用紫外光照明還具有獨(dú)特的效果。生物細(xì)胞中的原生質(zhì)對可見光幾乎是不吸收的，而蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子對紫外光具有特殊