【正文】 定性定量分析時(shí)薄層厚度為 ～ ，制備薄 層厚度為 ～ 2mm。 （ 2）預(yù)制板 預(yù)制板是由工廠生產(chǎn)出來(lái)的商品板，使用方便，涂 布均勻，薄層光滑，牢固結(jié)實(shí)，分離效果及重現(xiàn)性好。 品種繁多，規(guī)格齊全，能滿足不同的分析要求。 第一節(jié) 吸附色譜法 2 點(diǎn)樣體積：經(jīng)典薄層一般為 1～ 10μL，高效薄層為 100～ 500nL； 點(diǎn)樣形狀：一般為圓形點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊 ～ ，樣點(diǎn)直徑為 2～ 3mm，高效薄層原點(diǎn)直徑 約為 1mm，要盡可能避免多次點(diǎn)樣； 點(diǎn)間距離：可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況而定。一般經(jīng)典薄層為 1～ 2cm，高效薄層為 ； 常用的點(diǎn)樣器具：定量毛細(xì)管（ 、 5和 10μL）和鉑銥合金毛細(xì)管（ 100nL和 200nL），另 一類是注射器式的可變體積 微量點(diǎn)樣器和毫微點(diǎn)樣 器，用手工點(diǎn)樣時(shí)常用定量毛細(xì)管。 第一節(jié) 吸附色譜法 薄層點(diǎn)樣示意圖 S對(duì)照品溶液； ； －原點(diǎn)； d1點(diǎn)間距離； d2原點(diǎn)與板底邊距離； d3展距； F溶劑前沿 F s 1 2 s 1 2d3d2d 1第一節(jié) 吸附色譜法 3 點(diǎn)樣后的薄層，置密閉的玻璃槽中，用合適的 展開(kāi)劑展開(kāi)。展開(kāi)劑浸入薄層下端高度不應(yīng)超過(guò) 。點(diǎn)樣處不可接觸展開(kāi)劑，展距一般為 8～ 15cm。 對(duì)于樣品成分復(fù)雜的 混合物，可采用雙向展開(kāi)法。 第一節(jié) 吸附色譜法 點(diǎn)于同一薄層的同一物質(zhì)的斑點(diǎn)，在色譜展開(kāi) 過(guò)程中，靠薄層邊緣處斑點(diǎn)的 Rf值與中心區(qū)域斑點(diǎn) 的 Rf值有所不同，此稱 邊緣效應(yīng) 。 第一節(jié) 吸附色譜法 為了減少邊緣效應(yīng)，可采取下列辦法： (1)最好用較小體積的展開(kāi)缸或?qū)⒈釉诟變?nèi)放置一定時(shí)間，待溶劑蒸汽達(dá)到飽和后再行展開(kāi)； (2)在展開(kāi)缸內(nèi)壁貼上浸 濕展開(kāi)劑的濾紙條； (3)如采用 3cm以下的狹 小薄板，只點(diǎn) 2～ 3個(gè)點(diǎn)。 第一節(jié) 吸附色譜法 4 （ 1 ②有些化合物在可見(jiàn)光下不顯色，但可吸收紫外光，且能發(fā)射更長(zhǎng)波長(zhǎng)的光而顯示不同顏色的熒光斑點(diǎn)，故在紫外燈下顯現(xiàn)不同顏色。紫外分析儀有短波型(254nm)和長(zhǎng)波型 (366nm)兩種燈。 ③在可見(jiàn)紫外光下都不顯色，也沒(méi)有合適顯色方法的化合物，可以用熒光薄層進(jìn)行分離?；衔镌谧贤夤鉄粝驴稍诎l(fā)亮的背景上顯示暗斑。 第一節(jié) 吸附色譜法 （ 2 ①噴霧顯色 將顯色劑用電動(dòng)薄層噴霧器直接噴灑于硬 板上，根據(jù)顯色劑的不同，可直接顯色或加熱顯色。 ②浸漬顯色 也可用浸漬法處理薄層，使生成顏色穩(wěn) 定、輪廓清楚、靈敏度高的色斑。利用某些物質(zhì)的蒸 氣與樣品作用生成不同顏色或產(chǎn)生熒光，也可用于斑 點(diǎn)的檢出。 ③蒸氣檢出法 多數(shù)有機(jī)化合物能吸附碘蒸氣而顯示黃 色斑點(diǎn)。有些化合物遇碘蒸氣后發(fā)生紫外吸收的變化 第一節(jié) 吸附色譜法 ? 五、定性與定量分析 (一 ) Rf 在薄層色譜法中，常用 比移值 Rf來(lái)表示各組分在 色譜中的位置。 Rf 原點(diǎn)至溶劑前沿的距離原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離? Rf與分配系數(shù) K及容量因子 k之間的關(guān)系為： Rf Rf值為常數(shù)，其值在 0～ 1之間。 Rf =0，表示化合物在薄層上不隨溶劑的擴(kuò)散而移動(dòng)，仍在原點(diǎn)位置； Rf =1，表示溶質(zhì)不進(jìn)入固定相，即表示溶質(zhì)和溶劑同步移動(dòng)。 一般要求 Rf值在 ～ 。 kVVKms ???? 1 111第一節(jié) 吸附色譜法 影響 Rf值 最重要的因素是吸附劑的性質(zhì)與展開(kāi) 劑的極性和溶解能力。 當(dāng)應(yīng)用同一種吸附劑和同一種展開(kāi)系統(tǒng)時(shí)，被 測(cè)物質(zhì)的 Rf 1．薄層厚度 2．展開(kāi)距離 3．展開(kāi)容器中展開(kāi)劑蒸氣的飽和度 4．點(diǎn)樣量 5．薄層含水量 第一節(jié) 吸附色譜法 Rst 為了解決由于 Rf值重現(xiàn)性差，進(jìn)行定性困難的 問(wèn)題，常采用相對(duì)比移值 Rst來(lái)定性。 相對(duì)比移值 Rst Rst值是相對(duì) Rf值，是樣品與參考物移動(dòng)距離之 比，可消除許多系統(tǒng)誤差。參考物是另外加入也可 以直接以樣品中某一組分作為參考物。 Rst值可以大于 1 的距離原點(diǎn)至參考物斑點(diǎn)中心距離原點(diǎn)至樣品斑點(diǎn)中心的?stR第一節(jié) 吸附色譜法 ? 1．間接定量法 (洗脫測(cè)定法 ) 薄層展開(kāi)后，將被測(cè)物 斑點(diǎn)或區(qū)帶捕集，用溶劑洗 脫，然后再用適當(dāng)?shù)姆治龇? 法 (比色法、分光光度法、 氣相色譜、熒光分析法等 ) 2．薄層掃描法 該法快速、簡(jiǎn)便，結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確，適用于多 組分物質(zhì)和微量組分的定量。 （ 1）薄層掃描儀 薄層掃描儀光學(xué) 系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖 第一節(jié) 吸附色譜法 ① 測(cè)定方式及原理 A 吸收測(cè)定法 可見(jiàn)區(qū) (370～ 700 nm)用鎢燈，紫外區(qū)(200～ 370nm)用氘燈為光源。 B 反射測(cè)定法 光束照到薄層斑點(diǎn)上測(cè)量，反射光強(qiáng)度。 C 透射測(cè)定法 光束照到薄層斑點(diǎn)上，測(cè)量透射光強(qiáng)度。 D 熒光測(cè)定法 用汞燈或氙燈 (200～ 700 nm)為光源。 吸收參數(shù)（ KX）與樣品濃度成正比，所以無(wú)論是反 射法還是透射法，測(cè)得值與樣品之間都不呈線性。 透射法測(cè)定時(shí)， SX值越大，吸光度越大；反射法測(cè) 定時(shí)， SX值越大，反射度越小。 SX值取決于薄層吸附劑的性能、粒度和分布情況。 SX值要預(yù)先測(cè)定，通過(guò)儀器的線性補(bǔ)償器，用電路系統(tǒng) 將彎曲的曲線校正為直線后用于定量。 線形校正 1校正前的標(biāo)準(zhǔn)曲線 2校正后的標(biāo)準(zhǔn)曲線 第一節(jié) 吸附色譜法 ② 掃描方式 掃描方式分線性 (直線 )掃描和鋸齒 (曲折 )掃描法。 ? 鋸齒形掃描方式能消除展開(kāi)后斑點(diǎn)形狀不規(guī)則而引 起的誤差，可獲得滿意的定量結(jié)果。 ③雙波長(zhǎng)法掃描 光源的光分兩路，通過(guò)兩個(gè)分光器出來(lái)兩束不同波 長(zhǎng)的光。一路用于測(cè)量樣品，稱樣品波長(zhǎng) λS；另一路 做為對(duì)照，稱參比波長(zhǎng) λR。 ? 雙波長(zhǎng)法可以消除斑點(diǎn)處薄層本身的干擾，消除薄 層厚度不均勻引起的基線波動(dòng)，能可靠地檢測(cè)痕量組分 . 第一節(jié) 吸附色譜法 （ 2）定量方法 ①外標(biāo)法 分為外標(biāo)一點(diǎn)法和外標(biāo)二點(diǎn)法。 A 外標(biāo)一點(diǎn)法 工作曲線通過(guò)原點(diǎn)（