第九章酶免疫技術(shù)-文庫吧
2025-07-17 12:59 本頁面
【正文】 HRP 供氫體 DH2習(xí)慣上被稱為底物，底物有多種 H2O2為受氫體， HRP對受氫體的專一性很高 常用底物 酶和酶作用底物 HRP的常見底物 鄰苯二胺 OPD 四甲基聯(lián)苯胺 TMB 5氨基水楊酸 5ASA 2,2′ 氨基 二 (3乙基 苯并噻唑啉磺酸 6)銨鹽 ABTS 常用底物 酶和酶作用底物 OPD反應(yīng)后顯橙黃色，加酸終止反應(yīng)后呈棕黃色，測定波長 492nm。不穩(wěn)定，致癌性。 TMB反應(yīng)后顯藍(lán)色 ，加酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色 ,測定波長450nm ，穩(wěn)定，無致癌性， ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。 HRP的常見底物 酶和酶作用底物 AP的 底物 β Gal 的底物 對 硝基苯磷酸酯（ pNPP ） 4甲基傘酮基 β D半 乳糖苷（ 4MUG ） 經(jīng) AP作用后的產(chǎn)物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405 nm。 酶作用后，生成高強度熒光物 ，用熒光計 測量。 常用底物 酶和酶作用底物 酶免疫技術(shù)的核心組成部分 酶結(jié)合物（ conjugate） 酶標(biāo)記物 通過化學(xué)反應(yīng)或免 疫學(xué)反應(yīng)，讓酶與 抗體或抗原形成的 結(jié)合物 二、酶標(biāo)記抗體或抗原 ?抗原要求純度高，抗原性完整 ?抗體需要特異性好、效價高、親合力強以及比活性較高，能批量生產(chǎn)，易純化。 制備方法要求 酶標(biāo)記抗體或抗原 制備方法要求 技術(shù)方法簡單、產(chǎn)率高，重復(fù)性好 標(biāo)記反應(yīng)不影響酶和抗原或抗體的活性 酶標(biāo)記物穩(wěn)定 ，不形成聚合物 酶標(biāo)記抗體或抗原 制備方法 過碘酸鈉法（直接法） 常用于 HRP標(biāo)記抗體或抗原 戊二醛交聯(lián)法 酶標(biāo)記抗體或抗原 戊二醛交聯(lián)法 戊二醛分子中有兩個相同的醛基，可分別與 HRP和蛋白質(zhì)分子中的氨基結(jié)合。該法有一步法和二步法。二步法標(biāo)記效率比一步法高，酶標(biāo)記物質(zhì)量較均一。 酶標(biāo)記抗體或抗原 純化及鑒定 標(biāo)記完成后應(yīng)除去反應(yīng)液中的游離酶、游離抗體或抗原、酶聚合物以及抗體或抗原聚合物，避免游離酶增加非特異顯色，以及游離抗體或抗原起競爭作用而降低特異性染色強度 常用的純化方法： 葡聚糖凝膠 G200/G150過柱層析純化 50%
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