【正文】 生物工程技術(shù)，實(shí)施蘋果無病毒苗木繁育基地建設(shè)，形成融蘋果優(yōu)質(zhì)種苗快繁、生產(chǎn)、推廣銷售、技術(shù)指導(dǎo)和農(nóng)民培訓(xùn)于一體的具有較強(qiáng)科技示范帶動作用的現(xiàn)代種苗生產(chǎn)示范基地，豐富和優(yōu)化蘋果種苗市場供應(yīng)，加速蘋果品種結(jié)構(gòu)和品質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，為黃土高原地區(qū)生態(tài)環(huán)境建設(shè)和可持續(xù)發(fā)展做出貢獻(xiàn)。項(xiàng)目建成運(yùn)營后，年可生產(chǎn)蘋果無病毒良種苗木200萬株。:本項(xiàng)目計(jì)劃建設(shè)組培車間296平方米，配套蘋果無病毒種苗組培生產(chǎn)線1條。：本項(xiàng)目計(jì)劃建設(shè)可控溫室1496平方米。：本項(xiàng)目計(jì)劃建設(shè)網(wǎng)棚1056平方米。：本項(xiàng)目通過引進(jìn)蘋果無病毒優(yōu)質(zhì)種源，計(jì)劃建設(shè)采穗圃50畝，苗圃800畝，配套田間工程，其中包括機(jī)井2眼，節(jié)水灌溉工程450畝，水池10個，田間道路4500平方米，供電線路1600米等。：本項(xiàng)目計(jì)劃配套建設(shè)業(yè)務(wù)用房198平方米，鍋爐房101平方米，庫房兩座392平方米等單體工程。本項(xiàng)目總建筑面積為3539m2。并配套建設(shè)室外工程及綠化等。第六章 建設(shè)地點(diǎn)及總圖布置蘋果無病毒苗木的產(chǎn)地應(yīng)臨近蘋果主產(chǎn)區(qū)，選擇在生態(tài)環(huán)境良好，遠(yuǎn)離污染源，并具有可持續(xù)生產(chǎn)能力的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)區(qū)域。具體地說，就是要選在蘋果的最適宜區(qū)或適宜區(qū)，并遠(yuǎn)離城鎮(zhèn)、交通要道(如公路、鐵路、機(jī)場等)無工業(yè)“三廢”排放點(diǎn)。并選擇水源干凈、光照充足、地勢開闊、土壤疏松、無嚴(yán)重病蟲害，周邊200m無梨樹，100m無蘋果園，交通便利的地段，建脫毒母本園和采穗圃或脫毒苗圃地。我國有三個地區(qū)符合新紅星等蘋果最適宜栽植區(qū)的氣候條件。一是隴東南、渭北地區(qū)，包括某某天水、慶陽(西峰以南)、平?jīng)鍪写蟛糠挚h和陜西渭北的銅川、洛川、禮泉、彬縣、長武等縣。某某縣地處某某平?jīng)鍪?，是蘋果栽植最適宜地區(qū)。某某縣位于某某省中部的六盤山西麓，黃土丘陵溝壑區(qū)。地理坐標(biāo)為北緯35176。03′—35176。28′，東經(jīng)105176。46′—106176。23′。東鄰華亭縣，南與張家川回族自治縣、秦安縣毗連，西接靜寧縣，北和寧夏回族自治區(qū)隆德縣、涇源縣接壤。平均海拔1634m。屬大陸性季風(fēng)氣候區(qū)。冬寒半年，夏炎短暫，秋早春遲，光能豐富，降水偏少?！?，最冷月在1月份，℃；最熱月在7月，℃；，(1964年)，(1997年)；，最大凍土層深63cm。多年平均日照時數(shù)2790小時。地表水主要有葫蘆河、某某河、水洛河、貧李溝河四條河流，均屬渭河水系，，地下水主要有第四系潛水和深層地下水。據(jù)概算，，河谷川區(qū)與河谷地段藏量較豐，埋藏深度一般1—，最深不過5米。項(xiàng)目區(qū)地處某某縣水洛鎮(zhèn)中川村的縣高科技林木種苗培育中心，交通方便，秦隆公路、涇甘公路穿越全境，縣、鄉(xiāng)公路通達(dá)各村。項(xiàng)目實(shí)施區(qū)某某縣地形地貌屬河谷川地，屬于新生代以來地殼運(yùn)動比較活動的構(gòu)造地區(qū)。喜馬拉雅新構(gòu)造運(yùn)動中，隆起六盤山山脈，東北部成為基巖棵露的高山區(qū)，西南部成為低山丘陵區(qū)，構(gòu)成現(xiàn)代地貌骨架。后經(jīng)線狀侵蝕，切割成千溝萬壑，河谷、丘陵、高山相間。東北高，西南低，群山層巒。最高峰桃木山海拔高度2857米，最低處葫蘆河下游張家下灣1405米，相對高度1452米。項(xiàng)目區(qū)水洛鎮(zhèn)中川村的縣高科技林木種苗培育中心位于某某縣縣城東部，耕地土壤是在黃土母質(zhì)上發(fā)育而成的黑麻土或黃麻土，呈粉狀結(jié)構(gòu)，屬重壤土或中壤土，土質(zhì)疏松，性涼口緊，蓄水保肥性好，%，％，％，，肥力較高。（1）甲方提供的場區(qū)現(xiàn)有地形、地貌、氣象、水文、地質(zhì)資料。（2）場區(qū)現(xiàn)有區(qū)域規(guī)劃、供水、排水、供電等情況。（3）國家及行業(yè)有關(guān)總圖布置的規(guī)定和規(guī)范。（1）組培集約化生產(chǎn)工廠一般要求遠(yuǎn)離主要交通路線，減少空氣污染及空氣微塵含量，但又要交通方便，利于產(chǎn)品的運(yùn)出及原料的運(yùn)入。（2）遠(yuǎn)離帶有水及空氣污染源的工廠及村莊等，苗圃區(qū)100m以內(nèi)不得栽植梨樹。（3）建場地址要有良好的水質(zhì)水源，且供水方便，水源充足，具備便利的排水條件。（4）組培車間周圍有一定數(shù)量的苗圃用地，供建立大型育苗圃地使用。（5）場區(qū)內(nèi)應(yīng)建立合理便捷的道路系統(tǒng)，排灌系統(tǒng)、林網(wǎng)系統(tǒng)，最好能夠形成完整、合理的“生物鏈”，達(dá)到循環(huán)高效、合理利用的目的。本項(xiàng)目建設(shè)場地位于某某縣水洛鎮(zhèn)中川村縣高科技林木種苗培育中心，地處水洛河河床階地上，水源充足，水質(zhì)清淡，適于灌溉和人畜飲用，因此苗圃發(fā)展有可靠的水源保證。10kv輸電線路遍布全縣，農(nóng)村電網(wǎng)改造基本完成，供電保證率高。場區(qū)地形呈長方形，南北長約2320m，東西平均寬230m，場地總占地面積870畝，地勢基本平坦。按項(xiàng)目計(jì)劃在場址中部建設(shè)組培車間、日光溫室及附屬建筑，在周邊安排網(wǎng)棚、采穗圃、育苗圃等種植地。按生產(chǎn)需要及流程，場區(qū)沿南北向設(shè)縱向6m寬主干道路，沿橫向設(shè)置4道6m寬道路，將場區(qū)分隔成十塊生產(chǎn)小區(qū)及圃地。組培車間及日光溫室區(qū)位于場部主干道兩側(cè)，并設(shè)置磚圍墻進(jìn)行隔離。，采用碎石路面，沿場區(qū)外圍及干道種植防風(fēng)林帶，場區(qū)空余地帶種植牧草，形成良好的環(huán)境。總圖布置詳見總平面初設(shè)圖。第七章 工藝技術(shù)方案苗木新梢生長到30—50cm高溫室盆栽選擇品種切取莖頂部3—4cm做為外殖體消毒放入38℃177。1℃的條件下，培育30天轉(zhuǎn)接在分生叢生芽培養(yǎng)基中—將無根芽段轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)莖得到完整的再生試管苗繼代增殖叢生芽溫室練苗移栽酶聯(lián)檢測田間苗圃移栽指示植物檢測脫毒苗蘋果無病毒苗木離體培養(yǎng)的一般工藝流程：品種選擇盆栽原種脫毒苗分生組織頂芽做外殖株外植體處理消毒分化叢生芽培養(yǎng)莖培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基滅菌接 種接 種繼代增殖叢生芽生根培養(yǎng)再生植株煉苗過渡移栽溫室苗床主苗圃原種脫毒苗田間苗圃本項(xiàng)目無病毒組培苗繁育技術(shù)參數(shù)為：試管莖尖增殖系數(shù)達(dá)到5—6試管莖苗生根率大于70%試管苗入土移栽成活率大于70%蘋果的病毒種類較多，依據(jù)國家技術(shù)監(jiān)督局1991年發(fā)布的《蘋果病毒母本樹和苗木檢疫規(guī)程》對蘋果脫毒苗木必須進(jìn)行檢測。蘋果病毒分為潛隱性病毒和非潛隱性病毒。我國規(guī)定蘋果無毒苗必須脫去的潛隱性病毒是：“褪綠葉斑病毒”、“莖溝病毒”、“莖痘病毒”；非潛隱性病毒是“蘋果 銹果病毒”、“花葉病毒”、“綠皺病毒”。脫去病毒的檢測方法主要有：酶聯(lián)免疫檢測和指示植物檢測。蘋果病毒病脫除方法主要有熱處理法、莖尖培養(yǎng)法、熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)法、莖尖嫁接以及應(yīng)用病毒抑制劑等方法。在本項(xiàng)目中將采用熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)法進(jìn)行蘋果苗脫毒。即將待脫毒蘋果品種盆栽苗置于37177。1℃恒溫下處理28天，—，以生產(chǎn)無病毒試管苗木。對生產(chǎn)的試管苗采用酶聯(lián)免疫吸附法（Elisa）進(jìn)行病毒檢測。酶聯(lián)免疫吸附法是用兩層病毒抗體夾層吸附，從樹枝上剝下樹皮或葉，榨出汁液，提純病毒。將純化病毒注入家兔制造抗血清，制取純化的r球蛋白，吸附于塑料吸附盤中96個小穴內(nèi)(Microtiterplate)，r蛋白與抗體統(tǒng)合后，與堿性磷酸酶相結(jié)合，從吸附盤顯色中表現(xiàn)病毒的存在與否。具體方法是：，加入相當(dāng)于嫩枝2倍體積的磷酸緩沖液(%牛血清蛋白和2%PVP)，研磨后低速離心，取粗提液再稀釋到10倍，每品種處理4孔。以只加磷酸緩沖液孔為對照。用DG3022型酶聯(lián)免疫檢測儀測樣。指示植物檢測利用指示植物：蘇俄蘋果、光輝、弗吉尼亞小蘋果、金冠、國光等做為指示植物。采用“二重芽接法”砧木選用傳毒的“八棱海棠”在檢測芽的上方1—2cm處搭接帶雙芽的指示植物，根據(jù)指示植物的典型病毒癥狀表現(xiàn)，判斷待檢品種的病毒種類：。（1）從國家種質(zhì)資源圃引進(jìn)10個無毒蘋果品種以優(yōu)良紅富士為主栽品種，以優(yōu)良新紅星系、嘎拉系為輔，脫毒授粉樹比例為8:1。（2）在隔離條件下，將土壤消毒后盆栽脫毒苗，待新梢生長到30—50cm時，采集1—3mm莖尖做為外殖體進(jìn)行接種。采用甘農(nóng)大創(chuàng)建的綜合無傷消毒法：外殖體材料→流水沖洗10分鐘→70％酒精30s→蒸餾水沖洗2遍→％升汞5—8分鐘→在超凈工作臺上用無菌水沖泡3遍→剝?nèi)∏o尖→轉(zhuǎn)接在附加一定激素的MS基本培養(yǎng)基上。（3）培養(yǎng)條件：光照3000LX、光周期16:8或全光照、相對濕度65％；（4）獲得無菌外殖體材料后，篩選、研究叢生芽繼代高效增殖的激素配組，提高繁殖系數(shù)。在獲得大量3—5cm叢生芽后，轉(zhuǎn)入1/2大量元素的MS生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)。（5）待生根試管苗長到6cm左右時，在連棟智能溫室苗床進(jìn)行光培練苗，在一定時問內(nèi)光強(qiáng)從5000LX升高到15000LX，相對濕度從95％逐漸下降到70％；通過光培練苗后在營養(yǎng)缽中進(jìn)行移栽過渡。（6）用不帶病毒的山荊子(Maius baccata )種子層積處理后點(diǎn)播在營養(yǎng)缽中，待無毒砧木苗生長到10cm時用脫毒試管苗的微芽嫁接。（7）嫁接苗在外界平均溫度穩(wěn)定在15℃時在隔離大田苗圃移栽。（8）將溫室中部分營養(yǎng)缽中自根試管苗，在隔離網(wǎng)室中移栽獲得建原原種母本園采穗圃的苗木。(為建無毒采穗圃提供苗木)。（1）選擇水源干凈、光照充足、土壤蔬松、周邊300m無梨樹(梨苗圃和100m內(nèi)無蘋果園(蘋果苗圃)的熟地建立原種無毒苗圃。（2）苗圃地起垅覆膜，垅寬40cm，在氣溫穩(wěn)定在15℃時，在垅上打孔。每垅栽植兩行在溫室己微芽嫁接的營養(yǎng)袋苗。株行距采用寬、窄行；株距12cm，窄行距20cm，寬行距70cm，垅中心線距90cm。每畝定植11600株。（3）苗圃地的管理：在接穗生長到30cm左右時斷垂直根；及時防治病蟲害。（4）嫁接工具、修技刀、剪的消毒：在無毒苗圃使用前用消毒液或70%的酒精進(jìn)行消毒。嚴(yán)格禁止在修剪普通梨、蘋果樹后的工具，末經(jīng)消毒又修剪、嫁接脫毒苗。（5）土肥水管理：同普通育苗圃。（1）選擇水源干凈、光照充足、土壤疏松、周邊300m無梨樹和100m內(nèi)無蘋果樹、前三年內(nèi)沒有育過梨和蘋果苗的耕作地，建立原種無毒母本園。（2）母本園最好采用南北行向或依地形而定(以長邊為行向)，株行距為24m；每個脫毒品種一行，授粉樹按1:8配置；品種比例為優(yōu)質(zhì)紅富士系占70%、三紅優(yōu)系占20%、新嘎拉系占10%。（3）定植采用豐產(chǎn)溝栽法。（4）苗木定植后及時防治病蟲害，特別注意防治葉蟬類昆蟲傳毒。（5）剪取接穗時嚴(yán)格注意工具消毒，防止接觸傳毒。（6）土、肥、水管理同普通果園。 。（1）選擇水源干凈、光照充足、土壤疏松、周邊200m無梨樹和100m內(nèi)無蘋果園的地塊建立生產(chǎn)用無毒苗圃。（2）苗圃地最好采用寬、窄行起垅點(diǎn)播或平畦條播不帶病毒的山荊子（Maius baccata ）層積處理種子，用無毒母本采穗圃的芽進(jìn)行嫁接。隨采隨用嚴(yán)防品種接穗混雜。苗圃地嫁接后及時繪制品種圖。（3）苗圃地的管理：及時防治病蟲害，每次使用前注意嫁接工具、修技刀、剪的消毒。（4）其它管理同普通育苗圃。（5）苗木出圃時嚴(yán)格注意品種純度和授粉樹搭配并將苗木分級、掛牌。第八章 土建工程及設(shè)備方案。（1）農(nóng)業(yè)部農(nóng)計(jì)函[2004]421號《關(guān)于天津等33個園藝作物良種繁育基地建設(shè)項(xiàng)目可行性研究報(bào)告的批復(fù)》。（2）《某某省某某縣蘋果無病毒良種苗木繁育基地建設(shè)項(xiàng)目可行性研究報(bào)告》。（3）甲方提供的設(shè)計(jì)要求，現(xiàn)場地形圖及工程地質(zhì)勘察報(bào)告。（4）國家、建設(shè)部頒布的有關(guān)建筑、結(jié)構(gòu)、抗震、給排水、采暖、通風(fēng)、電氣工程設(shè)計(jì)規(guī)范、規(guī)程等。本項(xiàng)目土建及田間工程安排詳見下表：序號項(xiàng)目名稱單位建筑面積結(jié)構(gòu)類型一土建工程1組培車間m2296單層磚木結(jié)構(gòu)，磚條基2可控溫室m21496輕鋼骨架中空PC板，連體式拱型溫棚3網(wǎng)棚m21056砼立柱網(wǎng)棚4業(yè)務(wù)用房m2198單層磚混結(jié)構(gòu)5鍋爐房m2101單層磚混結(jié)構(gòu)6庫房（2棟）m2392單層夾芯板輕鋼結(jié)構(gòu)小計(jì)m23539二田間工程1機(jī)井眼22節(jié)水灌溉畝450苗圃800畝，采穗圃50畝3水池個104田間道路m245005供電線路m1600小計(jì)6562。林木組織培養(yǎng)，就是用無菌操作方法，培養(yǎng)林木的一個離體器官、組織和細(xì)胞，使其再生成無數(shù)根芽齊全、遺傳性狀一致的小植株，以達(dá)到快速繁殖名特優(yōu)新品種的高新技術(shù)。組培車間是完成這一工作的場所。根據(jù)林木組織培養(yǎng)的工藝要求，組培車間土建安排的使用房間為：洗滌消毒室→實(shí)驗(yàn)室→天平室、藥品庫→緩沖間→接種室→培養(yǎng)室。其各功能用房土建設(shè)計(jì)要求是：（1）洗滌消毒室：洗滌玻璃儀器、培養(yǎng)瓶及用具的地方，內(nèi)設(shè)洗滌槽。并設(shè)置消毒滅菌設(shè)備，進(jìn)行培養(yǎng)基、衣物、用具等的高壓滅菌工作。（2）實(shí)驗(yàn)室：配制及分裝培養(yǎng)基的地方，內(nèi)設(shè)洗滌盆、電冰箱、培養(yǎng)基煮鍋、大型白磁磚工作桌、存放配置好母液及玻璃儀器的櫥柜、離子交換純水器及蒸鍋水器、培養(yǎng)瓶等。（3）天平室：設(shè)置水平的瓷磚面工作臺，放置天平。（4）藥品庫：存放配制培養(yǎng)基及清潔消毒用藥的庫房。（5）接種間：也稱無菌操作間，內(nèi)設(shè)超靜工作臺及相應(yīng)設(shè)備。要求干爽安靜、清潔明亮，設(shè)置紫外滅菌燈，使室內(nèi)保持良好的無菌狀態(tài)。（6）培養(yǎng)室：是儲存瓶子苗的地方，組培苗在培養(yǎng)室中生長、分化根直到移至苗圃。內(nèi)設(shè)培養(yǎng)架及各種儀器設(shè)備。組培車間工程為單層磚木結(jié)構(gòu)，建筑面積296m2，外設(shè)全封閉玻璃緩沖走廊，地面采用水磨石地面，內(nèi)設(shè)白瓷磚貼面洗滌盆及工作臺面，房內(nèi)作硬塑料板吊頂。采用木門及鋁合金密閉窗。基礎(chǔ)采用磚條形基礎(chǔ)。林木工廠化育苗的基本物質(zhì)技術(shù)條件之一，是生產(chǎn)環(huán)節(jié)中必須具備日光溫室，它能夠充分利用自然光熱資源，打破自然季節(jié)與氣候條件的約束，消除外界環(huán)境影響而進(jìn)行高度集約化生產(chǎn)，是林木育苗工程的主體結(jié)構(gòu)。（1）育苗日光溫棚平面設(shè)計(jì)。為了充分滿足苗木的集約化生產(chǎn)和便于在棚內(nèi)設(shè)置遮蔭、保溫