李帥論文10526-文庫吧
2025-06-07 22:07 本頁面
【正文】 bles frozen out in early stage and cultivate encouraged fresh semen bred in survival rate, weight and body length are no significant differences.. Key words: Esox lucius。 Methanol；Cryopreservation。Motility rate。 Fertilization rate。Nursing techneques of mandarin fish larvae 白斑狗魚(Esox lucius)屬鮭形目（Salmoniformes）、狗魚亞目（Esocoidei）、狗魚科(Esocidae)、狗魚屬(Esox),在我國境內(nèi)僅分布于新疆額爾齊斯河流域，白斑狗魚喜棲息于有支流的河道中，通常生活于水草叢生的沿岸地帶，屬大型肉食性兇猛魚類，生長速度快，食性以魚為主，其肉質(zhì)堅(jiān)韌少刺，口味鮮美，營養(yǎng)價(jià)值高，是一種暢銷且具有發(fā)展前景的淡水增養(yǎng)殖品種[1,2]。白斑狗魚過去一直是天然捕撈對(duì)象，由于受水土開發(fā)、過度捕撈等因素影響，其自然資源量急劇減少。因此，研究和開發(fā)白斑狗魚精液冷凍保存技術(shù)對(duì)其增養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和種質(zhì)保存具有重要意義。精液冷凍保存技術(shù)開始于20世紀(jì)50年代初，其范圍屬于低溫生物學(xué)。目前，常用的冷凍保護(hù)劑主要有二甲亞砜、甲醇、乙二醇和甘油等。近年來大量的研究表明甲醇是一種更為有效的冷凍保護(hù)劑，在對(duì)大西洋鮭和里海斑鱒精液的研究表明10%甲醇的保護(hù)效果都優(yōu)于5%或10%的DMSO的效果[3,4]。關(guān)于白斑狗魚精液冷凍保存技術(shù)開始于1978年[5]，1995年添加有10%蛋黃的Erdahl amp。 %的受精率[6]， M 蔗糖 和15% 二甲亞砜的精液稀釋液被證明更加有效（%）[7]。2000年又開發(fā)利用10%甲醇作為冷凍保存劑，含有9種成分的精液稀釋液[8]。最近一種利用10%甲醇作為冷凍保存劑， M葡萄糖、10% g/L %的受精率[9]。但是甲醇在白斑狗魚精液稀釋液中最適添加水平的研究未見報(bào)道。、受精率的影響，以及10%甲醇的稀釋液對(duì)繁殖苗種生長性狀的影響，開發(fā)出更好的精液冷凍保存技術(shù)，為生產(chǎn)應(yīng)用和種質(zhì)保存服務(wù)。1 材料與方法 實(shí)驗(yàn)材料 親魚的選擇實(shí)驗(yàn)所用白斑狗魚親魚為北園春市場(chǎng)出售的額爾齊斯河野生白斑狗魚，挑選身體健康且發(fā)育成熟的雄魚7條，雌魚4條。 實(shí)驗(yàn)環(huán)境實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所選擇在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)實(shí)驗(yàn)基地，親魚培育的水溫為11℃，養(yǎng)殖場(chǎng)所光線比較暗，同時(shí)采取必要的避光措施，盡量避免光線對(duì)精子的殺傷，減少實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤差。 實(shí)驗(yàn)方法 精液稀釋液的配制分別以0、15%的甲醇(MeOH)作為冷凍保護(hù)劑,，再添加10%的蛋黃、 g/L的KCl，配制出四種不同的白斑狗魚精液稀釋液。 精液的采集白斑狗魚精液采集按照F Lahnsteiner等人[10]的方法進(jìn)行。采精前先把雄魚體表的水用干毛巾擦干，用剪刀將魚體剪開后取出精巢，用干紗布吸完精巢表面的液體后用紗布包裹，然后用手進(jìn)行擠壓，將精巢內(nèi)的精液擠入干燥小燒杯中，整個(gè)過程要防止精液接觸水分。采精后在顯微鏡下進(jìn)行精子濃度和活力的檢查，將濃度適宜且活力旺盛的3條雄魚精液置于冰盒內(nèi)，閉光儲(chǔ)存待用。在人工授精前采用同樣的方法對(duì)另2條雄魚進(jìn)行精液的采集，用作對(duì)照的新鮮精液。 精液的冷凍保存分別將四種已預(yù)冷的冷凍稀釋液與精液以3：1的比例進(jìn)行混合，每種稀釋液裝10支，用燒熱的鑷子進(jìn)行封口，隨后將麥管水平放置在距液氮表面2 cm 處，經(jīng)過5 min的降溫后，迅速投入液氮中，然后裝入相應(yīng)的袋子中，保存在液氮罐內(nèi)。 卵子的采集與保存采集卵子前先把用干毛巾將成熟雌魚包好，并將體表特別是生殖孔附近擦干，然后由前向后對(duì)雌魚的腹部進(jìn)行適度的擠壓，將成熟的卵子擠入干燥的帶孔燒杯中，閉光儲(chǔ)存待用。 伊紅染色檢測(cè)精子活率精子活率的檢測(cè)按吳東等人的方法進(jìn)行[11]。% 伊紅染液在載玻片上混勻并加蓋蓋玻片, 1 分鐘后在高倍鏡下進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)數(shù)一個(gè)視野內(nèi)的著色精子和未著色精子，并按以下公式計(jì)算出相對(duì)精子活率。精子活率（%）= 未著色精子數(shù)/精子總數(shù)100。相對(duì)精子活率（%）= 凍精精子活率/鮮精精子活率100。 人工授精和孵化冷凍精液經(jīng)過半個(gè)小時(shí)的冷凍保存取出,并迅速在25℃水浴中解凍30秒。人工授精按5105∶1的精卵比例將精子與卵子混合, 并迅速加入配好的授精液（100 mM NaCl，1
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