李帥論文10526-文庫吧
2025-06-07 22:07 本頁面
【正文】 bles frozen out in early stage and cultivate encouraged fresh semen bred in survival rate, weight and body length are no significant differences.. Key words: Esox lucius。 Methanol；Cryopreservation。Motility rate。 Fertilization rate。Nursing techneques of mandarin fish larvae 白斑狗魚(Esox lucius)屬鮭形目（Salmoniformes）、狗魚亞目（Esocoidei）、狗魚科(Esocidae)、狗魚屬(Esox),在我國境內(nèi)僅分布于新疆額爾齊斯河流域，白斑狗魚喜棲息于有支流的河道中，通常生活于水草叢生的沿岸地帶，屬大型肉食性兇猛魚類，生長速度快，食性以魚為主，其肉質(zhì)堅韌少刺，口味鮮美，營養(yǎng)價值高，是一種暢銷且具有發(fā)展前景的淡水增養(yǎng)殖品種[1,2]。白斑狗魚過去一直是天然捕撈對象，由于受水土開發(fā)、過度捕撈等因素影響，其自然資源量急劇減少。因此，研究和開發(fā)白斑狗魚精液冷凍保存技術(shù)對其增養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和種質(zhì)保存具有重要意義。精液冷凍保存技術(shù)開始于20世紀50年代初，其范圍屬于低溫生物學。目前，常用的冷凍保護劑主要有二甲亞砜、甲醇、乙二醇和甘油等。近年來大量的研究表明甲醇是一種更為有效的冷凍保護劑，在對大西洋鮭和里海斑鱒精液的研究表明10%甲醇的保護效果都優(yōu)于5%或10%的DMSO的效果[3,4]。關(guān)于白斑狗魚精液冷凍保存技術(shù)開始于1978年[5]，1995年添加有10%蛋黃的Erdahl amp。 %的受精率[6]， M 蔗糖 和15% 二甲亞砜的精液稀釋液被證明更加有效（%）[7]。2000年又開發(fā)利用10%甲醇作為冷凍保存劑，含有9種成分的精液稀釋液[8]。最近一種利用10%甲醇作為冷凍保存劑， M葡萄糖、10% g/L %的受精率[9]。但是甲醇在白斑狗魚精液稀釋液中最適添加水平的研究未見報道。、受精率的影響，以及10%甲醇的稀釋液對繁殖苗種生長性狀的影響，開發(fā)出更好的精液冷凍保存技術(shù)，為生產(chǎn)應(yīng)用和種質(zhì)保存服務(wù)。1 材料與方法 實驗材料 親魚的選擇實驗所用白斑狗魚親魚為北園春市場出售的額爾齊斯河野生白斑狗魚，挑選身體健康且發(fā)育成熟的雄魚7條，雌魚4條。 實驗環(huán)境實驗場所選擇在新疆農(nóng)業(yè)大學水產(chǎn)實驗基地，親魚培育的水溫為11℃，養(yǎng)殖場所光線比較暗，同時采取必要的避光措施，盡量避免光線對精子的殺傷，減少實驗結(jié)果的誤差。 實驗方法 精液稀釋液的配制分別以0、15%的甲醇(MeOH)作為冷凍保護劑,，再添加10%的蛋黃、 g/L的KCl，配制出四種不同的白斑狗魚精液稀釋液。 精液的采集白斑狗魚精液采集按照F Lahnsteiner等人[10]的方法進行。采精前先把雄魚體表的水用干毛巾擦干，用剪刀將魚體剪開后取出精巢，用干紗布吸完精巢表面的液體后用紗布包裹，然后用手進行擠壓，將精巢內(nèi)的精液擠入干燥小燒杯中，整個過程要防止精液接觸水分。采精后在顯微鏡下進行精子濃度和活力的檢查，將濃度適宜且活力旺盛的3條雄魚精液置于冰盒內(nèi)，閉光儲存待用。在人工授精前采用同樣的方法對另2條雄魚進行精液的采集，用作對照的新鮮精液。 精液的冷凍保存分別將四種已預(yù)冷的冷凍稀釋液與精液以3：1的比例進行混合，每種稀釋液裝10支，用燒熱的鑷子進行封口，隨后將麥管水平放置在距液氮表面2 cm 處，經(jīng)過5 min的降溫后，迅速投入液氮中，然后裝入相應(yīng)的袋子中，保存在液氮罐內(nèi)。 卵子的采集與保存采集卵子前先把用干毛巾將成熟雌魚包好，并將體表特別是生殖孔附近擦干，然后由前向后對雌魚的腹部進行適度的擠壓，將成熟的卵子擠入干燥的帶孔燒杯中，閉光儲存待用。 伊紅染色檢測精子活率精子活率的檢測按吳東等人的方法進行[11]。% 伊紅染液在載玻片上混勻并加蓋蓋玻片, 1 分鐘后在高倍鏡下進行檢測，計數(shù)一個視野內(nèi)的著色精子和未著色精子，并按以下公式計算出相對精子活率。精子活率（%）= 未著色精子數(shù)/精子總數(shù)100。相對精子活率（%）= 凍精精子活率/鮮精精子活率100。 人工授精和孵化冷凍精液經(jīng)過半個小時的冷凍保存取出,并迅速在25℃水浴中解凍30秒。人工授精按5105∶1的精卵比例將精子與卵子混合, 并迅速加入配好的授精液（100 mM NaCl，1
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