槐米中蘆丁的提取及含量測(cè)定-文庫(kù)吧
2025-06-07 17:15 本頁(yè)面
【正文】 皿、量瓶（100ml、50ml、10ml）、10ml移液管、吸量管（1ml、5ml）。：飽和石灰水、濃鹽酸、蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100086201755）、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇（均為分析純）、甲醇（色譜純）、水（重蒸水）。2 實(shí)驗(yàn)原理及實(shí)驗(yàn)條件 蘆丁是黃酮類化合物，其基本母核為2苯基色原酮類化合物即C6C3C6結(jié)構(gòu)。分子式為C27H30O16，化學(xué)式見下圖。淡黃色小針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為174~178℃（含三分子結(jié)晶水），188℃(無(wú)水物)。能溶于二甲基亞砜和吡啶、甲酰和堿液，微溶于乙醇；丙酮和乙酸乙酯，幾乎不溶于水、氯仿、醚、苯、二硫化碳和石油醚。易溶于堿液中，呈黃色。酸化后復(fù)析出，可以溶于濃硫酸和濃鹽酸，呈深黃色，加水稀釋復(fù)析出。稀溶液遇三氯化鐵呈綠色。無(wú)氣味，在光的作用下漸變暗。查閱資料可知，UV λmaxEtOH nm：259，299（sh），359。IR vmaxKBr cm1：3400（OH）,1670(C=O)，1620，1520，1470（C6H5）。HNMR（DMSOd6）δ：（1H，dd,J=、）；（1H,d,J=）；（1H,d，J=）；（1H,d,J=）；（1H,d,J=）；（1H,d，J=）；（1H,d,J=）；（10H,m）；（3H,d，J=）。 蘆丁 槲皮素槲皮素，又名櫟精，槲皮黃素，分子式為C15H10O7，分子量302，化學(xué)式見上圖。黃色結(jié)晶，熔點(diǎn)為313314176。C（2分子結(jié)晶水），316176。C（無(wú)水物）。溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等溶劑，堿性水溶液呈黃色，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚。其乙醇溶液味道極其苦澀，可作為藥品，具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。由蘆丁的化學(xué)式可知：其基本母核是平面型結(jié)構(gòu)，2位上引入的苯環(huán)與色原酮部分形成交叉共軛體系，并通過(guò)電子轉(zhuǎn)移、重排，使共軛鏈延長(zhǎng)，同時(shí)7位及4/位引入OH或OCH3等助色團(tuán)后，因其促進(jìn)電子移位、重排，兩重作用都使蘆丁具有較深的顏色即淡黃色（色原酮部分原本無(wú)色），從而使蘆丁易于較其他黃酮類化合物鑒別。蘆丁分子中含有多個(gè)酚羥基，而且7位處于C=O的對(duì)位，4/位處于C=C的對(duì)位，在PΠ共軛效應(yīng)的影響下，使酸性較強(qiáng),易溶于堿液（飽和石灰水）中，酸化后溶解度降低復(fù)析出，從而可以用于蘆丁的提取和精制。蘆丁是由槲皮素3位上的羥基與蕓香糖脫水縮合成的苷，因而在酸性條件下又可以水解成槲皮素、鼠李糖、葡萄糖。蘆丁為黃酮苷，能與三價(jià)的鋁生成黃色配合物，在NaNO2的堿性溶液中呈紅色，在510nm波長(zhǎng)處有最大吸收。根據(jù)此顯色反應(yīng)用分光光度法可以測(cè)定蘆丁，但顯色反應(yīng)需要具備良好的重現(xiàn)性與靈敏性，因此必須控制反應(yīng)條件，主要是溶劑種類、試劑用量、溶液酸堿度、反應(yīng)時(shí)間和顯色時(shí)間等。 實(shí)驗(yàn)條件的選擇最大波長(zhǎng)的選擇：將蘆丁對(duì)照品加硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁處理后的溶液，用紫外分光光度計(jì)在200～600nm進(jìn)行掃描，標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液均在510nm處有最大吸收，故檢測(cè)波長(zhǎng)選擇為510[67]。3 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果 蘆丁的提?。翰捎盟崽釅A沉法[811]；（1）稱取槐米30g，在乳缽中研碎至槐米碎裂即可，置1000ml燒杯中，加入300ml飽和石灰水（以棉花過(guò)濾至澄明）調(diào)節(jié)pH 78之間，并且不斷攪拌，加熱煮沸15min，趁熱以棉花過(guò)濾（過(guò)濾前應(yīng)將棉花用水充分潤(rùn)濕，盡量趕出其中的氣泡）。（2）殘?jiān)偌?00ml飽和石灰水，保持PH 78之間，并不斷攪拌，同時(shí)煮沸10min，趁熱過(guò)濾，合并兩次濾液，放冷。（3）向?yàn)V液中加入濃鹽酸（邊加邊攪拌）調(diào)PH 34并放置過(guò)夜。（4）次日傾出上清液（不要振搖），抽濾沉淀（布氏漏斗中墊兩層濾紙）并用蒸餾水洗至pH 56，將濾得物置于表面皿上，得粗蘆丁。 蘆丁的精制 將粗蘆丁加300ml重蒸水，加熱，用飽和石灰水調(diào)PH 89,使充分溶解，趁熱少量趁熱抽濾，待濾液冷卻后加鹽酸調(diào)節(jié)PH 45，靜置，冷卻，抽濾，并用蒸餾水洗至PH 56,即可得比較純的蘆丁。 蘆丁的鑒定 呈色反應(yīng)：取上述蘆丁提取物34mg，加甲醇810ml使其溶解，分成3份做以下實(shí)驗(yàn)。 鹽酸鎂粉反應(yīng)（檢查是否有黃酮類化合物存在的最常用方法）：取上述溶液12ml，加2滴濃鹽酸，再加入少量鎂粉。在本實(shí)驗(yàn)中觀察到顏色變化：黃→紫→紅；說(shuō)明有蘆丁或者槲皮素存在。 鋯枸櫞酸反應(yīng)（區(qū)分蘆丁和槲皮素）：取上述溶液12ml，再滴加2％ZOCl2的甲醇溶液34滴，在本實(shí)驗(yàn)中觀察到溶液顏色加深；再繼續(xù)加入2％檸檬酸的甲醇溶液34滴，觀察到溶液顏色稍微變淺；此步顯色反應(yīng)證明有蘆丁的存在，但無(wú)法證明是否有槲皮素存在。因蘆丁溶液加ZOCl2后顏色加深（5OH存在），加入檸檬酸后顏色變淺；槲皮素加ZOCl2后顏色加深（5OH、3OHC存在），加入檸檬酸后顏色變化不明顯，由于顏色掩蓋效應(yīng)，不可排除兩同時(shí)存在。 а萘酚反應(yīng)(糖的檢測(cè))：取上述溶液12ml，然后再加10％а萘酚乙醇溶液2
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