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分子生物學(xué)碩士生復(fù)習(xí)題-文庫吧

2025-05-23 16:34 本頁面


【正文】 naA蛋白結(jié)合,起始新一輪的DNA復(fù)制。復(fù)制起始可能還受ATP水解過程調(diào)控,因?yàn)镈naA只有與ATP相結(jié)合時(shí)才能與oriC區(qū)DNA相結(jié)合。2. DNA子鏈的延伸主要包括兩個(gè)不同但相互有聯(lián)系的事件,即前導(dǎo)鏈和滯后鏈的合成。由DNA helicase解開雙螺旋,由拓樸異構(gòu)酶消除DNA鏈上的扭曲力,SSB結(jié)合使DNA單鏈穩(wěn)定。前導(dǎo)鏈的合成:由DnaG(primase)在復(fù)制起始位點(diǎn)附近合成一個(gè)1060 nt的RNA引物,然后由polII把dNTP加到該引物上。 滯后鏈的合成:產(chǎn)生Okazaki fragments,消除RNA引物并由DNA pol I補(bǔ)上這一小段DNA序列,由DNA Ligase把兩個(gè)片段相連。3. DNA鏈的終止當(dāng)子鏈延伸達(dá)到terminus region(ter,帶有多個(gè)20bp序列)時(shí),DNA復(fù)制就終止了。Ter有點(diǎn)像一個(gè)陷井(trap),使復(fù)制叉只能進(jìn)入,不能出來。Ter的功能主要是由TerTus復(fù)合物(ter utilization substance)來完成的。DNA pol Ⅲ是是多亞基組成的蛋白質(zhì),是合成DNA新鏈的主要復(fù)制酶,它在細(xì)胞中含量很少,但是催化效率高,異二聚體,全酶由α、β、γ、δ、ε、θ、τ、δ’、χ、ψ 10個(gè)亞基組成。其核心酶含有α,ε和θ三個(gè)亞基。α 亞基具有539?!?39。方向合成DNA的催化活性,每秒可以合成8個(gè)核苷酸ε 亞基具有339。→539。外切酶的功能,起到校正的作用,可提高聚合酶Ⅲ復(fù)制DNA的保真性。ε亞基常與α亞基形成一個(gè)緊密的1:l復(fù)合物,協(xié)同發(fā)揮功能。θ 亞基使核心酶相互連接,組裝核心酶的功能。τ 亞基:促使核心酶二聚化,與模板連接,具有ATP酶活性。β 亞基的功能猶如夾子,兩個(gè)β亞基夾住DNA分子并可向前滑動(dòng),使聚合酶在完成復(fù)制前不再脫離DNA,從而提高了酶的持續(xù)合成能力。γ,δ,δ′,χ和ψ亞基組成γ復(fù)合體,其功能是幫助β亞基夾住DNA,故稱為夾子裝置器。β二聚體自己并不能組裝到DNA 上 ,它是通過γ復(fù)合物與ATP協(xié)同作用催化ATP的水解而組裝到DNA上的。 Circle Replication。滾環(huán)式復(fù)制(rolling circle replication)是一種復(fù)制方式,復(fù)制叉沿環(huán)形模板復(fù)制一定次數(shù),每個(gè)反應(yīng)中新合成的鏈將前一反應(yīng)中合成的鏈拋出,形成與環(huán)狀模板鏈互補(bǔ)的一系列線性序列。這個(gè)過程。這個(gè)過程存在于某些噬菌體的營養(yǎng)復(fù)制過程和結(jié)合質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移復(fù)制過程。滾環(huán)復(fù)制復(fù)制過程包括:(1)一個(gè)由噬菌體基因組編碼的蛋白質(zhì)——A蛋白,在雙鏈DNA正鏈的特定位點(diǎn)即復(fù)制原點(diǎn)產(chǎn)生缺口。(2)切除原點(diǎn)后,A蛋白質(zhì)仍與它產(chǎn)生的5’端連接,3’端在DNA聚合酶的作用下延伸。(3)運(yùn)用滾環(huán)機(jī)制,此刻的3’-OH端延伸為一個(gè)新鏈。新鏈圍繞著環(huán)狀負(fù)鏈模板延伸,直到到達(dá)原點(diǎn)并代替原點(diǎn)。(4)在這里A蛋白質(zhì)與滾環(huán)和替代鏈尾部5’端相連,又轉(zhuǎn)回原點(diǎn)的生長點(diǎn)附近。(5)A蛋白又能識(shí)別原點(diǎn)并進(jìn)行切割,連接在新切割產(chǎn)生的末端,繼續(xù)循環(huán)。(6)完成切割后,被替代的正鏈以環(huán)化狀態(tài)釋放。A蛋白與環(huán)化有關(guān)。正鏈產(chǎn)物3’端和5’端的連接由A蛋白完成,這是每個(gè)復(fù)制循環(huán)末尾A蛋白釋放反應(yīng)的一部分,接著又開始下一個(gè)循環(huán)。滾環(huán)復(fù)制的特點(diǎn):(1)是單方向和不對(duì)稱的半保留復(fù)制。(2)產(chǎn)物是單鏈,但是可通過互補(bǔ)鏈的合成轉(zhuǎn)變成雙鏈。(3)子代分子可能是連環(huán)的,即對(duì)應(yīng)于每個(gè)單位基因組的相同DNA分子頭尾相連。(4)連環(huán)DNA隨后被切成于每一單位基因組相對(duì)應(yīng)的小片斷。(5)負(fù)鏈通常保持環(huán)狀,因而保留有一套完整的遺傳信息。端粒是真核細(xì)胞染色體末端的特殊結(jié)構(gòu),由端粒DNA和與端粒DNA特異結(jié)合蛋白組成的核蛋白復(fù)合物,廣泛存在于真核生物細(xì)胞中,具有特殊的功能。不同種類細(xì)胞的端粒重復(fù)單位不同,大多數(shù)長5~8bp,且多富含G,由這些重復(fù)單位組成的端粒,突出于其互補(bǔ)鏈12~16個(gè)核苷酸內(nèi)。人類端粒由5′TTAGGG3′的重復(fù)單位構(gòu)成,長度在5~15kb范圍。與端粒特異性結(jié)合的是端粒結(jié)合蛋白,迄今為止,只在少數(shù)生物中確定了端粒結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)及表達(dá)基因,然而端粒結(jié)構(gòu)與功能的保守性表明,這些端粒結(jié)合蛋白的特性可能普遍適用于其他真核生物。人類細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了一種端粒結(jié)合蛋白,但人類染色體末端的DNA蛋白復(fù)合體的結(jié)構(gòu)還不清楚。正常的體細(xì)胞中,隨細(xì)胞分裂次數(shù)的增加,端粒逐漸縮短端粒的長度與有絲分裂次數(shù)相關(guān),所以端粒又有細(xì)胞的“有絲分裂鐘”之稱。端粒酶是RNA與蛋白質(zhì)組成的核糖核蛋白,是一種RNA依賴性DNA聚合酶。端粒酶的主要作用是維持端粒的長度。它能利用端粒3′端單鏈為引物,自身的RNA為模板合成端粒重復(fù)序列添加到染色體末端,從而延長端粒的長度。人的生殖細(xì)胞、造血干細(xì)胞及T、B淋巴細(xì)胞中端粒酶有不同程度的表達(dá),而在正常的體細(xì)胞中,端粒酶處于失活狀態(tài),因此體細(xì)胞隨細(xì)胞分裂次數(shù)的增加端粒逐漸縮短。7. 闡述原核生物DNA修復(fù)機(jī)制(舉3例)。切除修復(fù),又稱切補(bǔ)修復(fù)。最初在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn),包括一系列復(fù)雜的酶促DNA修補(bǔ)復(fù)制過程,主要有以下幾個(gè)階段:核酸內(nèi)切酶識(shí)別DNA損傷部位,并在5’端作一切口,再在外切酶的作用下從5’端到3’端方向切除損傷;然后在 DNA多聚酶的作用下以損傷處相對(duì)應(yīng)的互補(bǔ)鏈為模板合成新的 DNA單鏈片斷以填補(bǔ)切除后留下的空隙;最后再在連接酶的作用下將新合成的單鏈片斷與原有的單鏈以磷酸二酯鏈相接而完成修復(fù)過程。切除修復(fù)并不限于修復(fù)嘧啶二聚體,也可以修復(fù)化學(xué)物等引起的其他類型的損傷。從切除的對(duì)象來看,切除修復(fù)又可以分為堿基切除修復(fù)和核苷酸切除修復(fù)兩類。堿基切除修復(fù)是先由糖基酶識(shí)別和去除損傷的堿基,在DNA單鏈上形成無嘌呤或無嘧啶的空位,這種空缺的堿基位置可以通過兩個(gè)途徑來填補(bǔ):一是在插入酶的作用下以正確的堿基插入到空缺的位置上;二是在核酸內(nèi)切酶的催化下在空位的5’端切開DNA鏈,從而觸發(fā)上述一系列切除修復(fù)過程。對(duì)于各種不同類型的堿基損傷都有特異的糖基酶加以識(shí)別。不同的核酸內(nèi)切酶對(duì)于不同類型損傷的識(shí)別也具有相對(duì)的特異性。切除修復(fù)功能廣泛存在于原核生物和真核生物中,也是人類的主要修復(fù)方式,嚙齒動(dòng)物 (如倉鼠、小鼠)先天缺乏切除修復(fù)的功能。重組修復(fù)。重組修復(fù)從 DNA分子的半保留復(fù)制開始,在嘧啶二聚體相對(duì)應(yīng)的位置上因復(fù)制不能正常進(jìn)行而出現(xiàn)空缺,在大腸桿菌中已經(jīng)證實(shí)這一DNA損傷誘導(dǎo)產(chǎn)生了重組蛋白,在重組蛋白的作用下母鏈和子鏈發(fā)生重組,重組后原來母鏈中的缺口可以通過DNA多聚酶的作用,以對(duì)側(cè)子鏈為模板合成單鏈DNA片斷來填補(bǔ),最后也同樣地在連接酶的作用下以磷酸二脂鍵連接新舊鏈而完成修復(fù)過程。重組修復(fù)也是嚙齒動(dòng)物主要的修復(fù)方式。重組修復(fù)與切除修復(fù)的最大區(qū)別在于前者不須立即從親代的DNA分子中去除受損傷的部分,卻能保證DNA復(fù)制繼續(xù)進(jìn)行。原母鏈中遺留的損傷部分,可以在下一個(gè)細(xì)胞周期中再以切除修復(fù)方式去完成修復(fù)。SOS修復(fù)。是SOS反應(yīng)的一種功能。SOS反應(yīng)是DNA受到損傷或脫氧核糖核酸的復(fù)制受阻時(shí)的一種誘導(dǎo)反應(yīng)。在大腸桿菌中,這種反應(yīng)由recAlexA系統(tǒng)調(diào)控。正常情況下處于不活動(dòng)狀態(tài)。當(dāng)有誘導(dǎo)信號(hào)如 DNA損傷或復(fù)制受阻形成暴露的單鏈時(shí),recA蛋白的蛋白酶活力就會(huì)被激活,分解阻遏物lexA蛋白,使SOS反應(yīng)有關(guān)的基因去阻遏而先后開放,產(chǎn)生一系列細(xì)胞效應(yīng)。引起SOS反應(yīng)的信號(hào)消除后,recA蛋白的蛋白酶活力喪失,lexA蛋白又重新發(fā)揮阻遏作用。8. 闡述DNA重組中相關(guān)的重要蛋白質(zhì)。RceA蛋白具有鏈交換,ATP酶及蛋白酶活性。它能結(jié)合到ssDNA上,促使DNA分子間
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