《細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)》ppt課件-文庫(kù)吧
2025-04-18 03:43 本頁(yè)面
【正文】 ? pH: ? 溫度 : 37 ℃ ，細(xì)胞培養(yǎng)箱 ? 氣體環(huán)境 O2 CO2: 5% CO2 +H2O ← →H 2CO3 ← →H + + HCO3 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 實(shí)驗(yàn)用品： ? 超凈工作臺(tái) ， 壓力蒸汽消毒器 ， 電熱干燥箱 ， 濾器 ， 酸缸 ， 紫外燈 ， 甲醛熏蒸器 ? CO2培養(yǎng)箱 ? 倒置顯微鏡 ? 酶標(biāo)儀 、 微孔板震蕩器 ? 液氮 罐 ? 自動(dòng)雙重純水蒸餾器 ， 純水儀 ? 耗材：培養(yǎng)瓶 ， 吸管 ， 電動(dòng)移液器 ， 培養(yǎng)板 ， 凍存管 ? 。 CO2培養(yǎng)箱 ? CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為 37 ℃ ， 5％ CO2 。 ? 使用 CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題： ①用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，需將瓶蓋微松，以保證通氣。 ②保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。定期消毒（ 90 ℃ ， 14 h或者紫外殺菌 )。 ③箱內(nèi)置 46 L蒸餾水，加入 100ml飽和硫酸銅溶液，以保持箱內(nèi)濕度，避兔培養(yǎng)液蒸發(fā)，并抑制真菌污染。 實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備 常用玻璃器皿清洗 ? 浸泡（自來(lái)水）、刷洗（洗衣粉）、泡酸（ 24小時(shí)）、 ? 流水沖洗、蒸溜水浸泡和沖洗、 50℃ 烘干 清潔液的配制 細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制 水：新鮮配置的三蒸水或去離子水 平衡鹽溶液： 無(wú) Ca2+、 Mg2+的緩沖液 PBS： NaCl g KCl g g KH2PO4 加水至 1000 ml 消化液 ? 胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健 ， 除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白 ， 影響細(xì)胞骨架 ， 從而使細(xì)胞分離 。 ? 胰蛋白酶液濃度 越高 ， 作用越強(qiáng) ， 但超過(guò)一定限度會(huì)損傷細(xì)胞 。 ? 胰蛋白酶是一種黃白色 粉末 ， 用無(wú) Ca2+、 Mg2+的 PBS緩沖液配制常用的胰蛋白酶液濃度是 ％ 。 用濾器過(guò)濾除菌 。 ? 胰蛋白酶液消化時(shí)間： 210分鐘 。 ? 用含血清培養(yǎng)液終止其對(duì)細(xì)胞的消化作用 培養(yǎng)基 ? 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是維持體外細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的溶液，分天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。 ? 合成培養(yǎng)基： 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。目前已設(shè)計(jì)出許多種培養(yǎng)基，如 TC19 MEM、 RPMI16 DMEM等。 ? 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。 血清中含有： ? 多種蛋白質(zhì) （ 白蛋白 、 球蛋白 、 鐵蛋白等 ） ? 多種金屬離子 ? 激素 ? 促貼附物質(zhì) ， 如纖粘蛋白 、 冷析球蛋白 、 膠原等 ? 各種生長(zhǎng)因子 ? 轉(zhuǎn)移蛋白 ? 不明成分 ? 一般說(shuō)來(lái) ， 含 5％ 小牛血清的培養(yǎng)基對(duì)大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死 ， 但支持細(xì)胞生長(zhǎng)一般需加 10％ 血清 。 ? 常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、馬血清等，其中以胎牛血清質(zhì)量最好。 ? 優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無(wú)沉淀物，無(wú)細(xì)菌、支原體、病毒污染。 ? 血清的滅活（消除補(bǔ)體活性）： 56 ℃ ， 30 分鐘 ? 血清的消毒：過(guò)濾除菌 抗生素的使用 ? 在培養(yǎng)液配制后，培養(yǎng)液內(nèi)常加適量抗菌素，以抑制可能存在的細(xì)菌的生長(zhǎng)。 ? 通常是青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位。 ? 慶大霉素：每毫升 100單位 —— 方便、廣譜、穩(wěn)定 完全培養(yǎng)基的組
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