實(shí)驗(yàn)10雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量-文庫(kù)吧
2025-04-14 05:38 本頁(yè)面
【正文】 酸溶液進(jìn)行滴定 ， 滴定所用無機(jī)酸的量 (mol)相當(dāng)于被測(cè)樣品中氨的量 （ mol） ， 根據(jù)所測(cè)得的氨量即可計(jì)算樣品的含氮量 。 因?yàn)榈鞍踪|(zhì)含氮量通常在 16 %左右 ， 所以將凱氏定氮法測(cè)得的含氮量乘上系數(shù) ， 便得到該樣品的蛋白質(zhì)含量 。 Folin酚試劑法 (Lowry法 )測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵 (—CO—NH—)，因此有雙縮脲反應(yīng) ， 在堿性溶液中 ， 能與 Cu2+形成絡(luò)合物 。 Folin酚反應(yīng)是在雙縮脲反應(yīng)的基礎(chǔ)上 ， 引進(jìn) Folin試劑 (磷鉬酸 —磷鎢酸試劑 )， 蛋白質(zhì) —銅絡(luò)合物能還原磷鉬酸 —磷鎢酸試劑 ， 生成藍(lán)色物質(zhì) 。在一定條件下 ， 藍(lán)色強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的量成正比例 。本法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便 、 靈敏度高 、 較紫外吸收法靈敏 10—20倍 ， 較雙縮脲法靈敏 100倍 。 其不足之處是此反應(yīng)受多種因素干擾 。 （ Tris緩沖劑 、 蔗糖 、硫酸銨 、 巰基化合物 、 酚 、 檸檬酸 ） 。 紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵 ， 因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì) ，吸收高峰在 280 nm波長(zhǎng)處 。 在此波長(zhǎng)范圍內(nèi) ， 蛋白質(zhì)溶液的光吸收值 (OD280)與其含量呈正比關(guān)系 ， 可用作定量測(cè)定 。 利用紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點(diǎn)是迅速 、簡(jiǎn)便 、 不消耗樣品 、 可回收利用 、 低濃度鹽類不干擾測(cè)定 。 含有核酸的樣品： 蛋白質(zhì)濃度 (mg/ml)= A280－ A260 總蛋白定量分析－ BCA（ Bicinchoninic acid，二辛可寧酸、二羧基二喹啉） ?準(zhǔn)確靈敏： BCA試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是 20－2
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