【正文】 競爭力的重要載體。要促進(jìn)經(jīng)濟(jì)更加快速有效的發(fā)展，必須這里抓好產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整。這是佛山打造廣東第三大城市，實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)騰飛的關(guān)鍵。從產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)和市場情景看，重點(diǎn)發(fā)展電子信息、新材料、光機(jī)電一體化、生物醫(yī)藥和機(jī)械裝備等高增長、高帶動(dòng)的產(chǎn)業(yè)，將可以在較短的時(shí)間內(nèi)建立起產(chǎn)業(yè)規(guī)模和競爭能力。本產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目集科研、開發(fā)、生產(chǎn)于一體，將填補(bǔ)該地區(qū)生物制藥產(chǎn)業(yè)的空白，并為廣東省或省外高校、研究機(jī)構(gòu)和企業(yè)進(jìn)行基因藥物的研究和實(shí)施產(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)平臺(tái)。同時(shí)促進(jìn)國內(nèi)生物技術(shù)創(chuàng)新性藥物的研究開發(fā)，加快生物工程藥物產(chǎn)業(yè)化，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)優(yōu)化調(diào)整。綜上所述，將這一成熟、先進(jìn)的高新技術(shù)成果應(yīng)用到規(guī)模生產(chǎn)中，時(shí)非常重要的。3. 項(xiàng)目具體內(nèi)容及研究方案. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）產(chǎn)業(yè)化主要研究內(nèi)容、擬解決的技術(shù)難點(diǎn)bFGF是一種多功能細(xì)胞生長因子，能刺激中胚層和神經(jīng)外胚層來源細(xì)胞的增殖，并具有促進(jìn)修復(fù)和再生的作用。十多年來bFGF在臨床上應(yīng)用于治療創(chuàng)傷、燒傷、慢性潰瘍等方面起到非常好的治療作用。本項(xiàng)目來源于國家863計(jì)劃，已經(jīng)完成臨床和中試，并獲得國家一類新藥證書及藥品生產(chǎn)文號(hào)，生產(chǎn)技術(shù)與工藝比較成熟，產(chǎn)業(yè)化研究的內(nèi)容主要是大規(guī)模生產(chǎn)的工藝穩(wěn)定性、成本控制、質(zhì)量控制，重點(diǎn)需解決的問題如下：. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）與其他細(xì)胞生長因子相比，發(fā)酵條件比較難以控制，常因pH值等變化導(dǎo)致細(xì)菌不生長或無表達(dá)，本項(xiàng)目的重點(diǎn)工作之一是摸索大規(guī)模發(fā)酵的條件，如細(xì)菌接種量、溶氧、攪拌轉(zhuǎn)速等工藝參數(shù)，建立細(xì)菌OD值、誘導(dǎo)時(shí)間與目的蛋白表達(dá)量的關(guān)系曲線，確定最優(yōu)發(fā)酵的條件。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）是相對(duì)不穩(wěn)定蛋白，分離純化及稀釋過濾過程中容易出現(xiàn)聚合或者降解，導(dǎo)致純度或活性等不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，所以在制備過程中重點(diǎn)提高目的蛋白穩(wěn)定性。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）的活性受溫度和水分含量的影響較大，因此，在凍干過程中重點(diǎn)需要考察不同溫度與凍干時(shí)間對(duì)水分含量與活性的影響，以選擇最適當(dāng)?shù)臏囟群蛢龈蓵r(shí)間，使凍干粉的水分含量低于3%，且活性受到的影響降到最低。由于重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）屬于不穩(wěn)定活性多肽，容易聚合和降解而導(dǎo)致生物活性降低，解決上述問題之后將為這一類蛋白的制備提供參考，建立解決蛋白類藥物普遍存在的“瓶頸”技術(shù)平臺(tái)。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）系列制劑的研究內(nèi)容、擬解決的技術(shù)難點(diǎn)由于重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）是多功能刺激因子，對(duì)與創(chuàng)傷修復(fù)有關(guān)治病有廣泛治療作用，但由于其生物活性受多種因素的影響而不穩(wěn)定。凍干粉劑能夠使其活性長期保存，在2~8℃保存時(shí)有效期為24個(gè)月；但是凍干粉劑在臨床應(yīng)用上存在使用不方便等問題，迫切需要其他劑型來取代；因此，開發(fā)經(jīng)過改構(gòu)或化學(xué)修飾的生物活性穩(wěn)定的重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）并用之于新劑型的開發(fā)極為必要。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）凝膠劑的研究內(nèi)容、擬解決的技術(shù)難點(diǎn)凝膠劑是近幾年局部外用制劑研發(fā)的熱點(diǎn)，凝膠劑作為新的藥物劑型在臨床上應(yīng)用已經(jīng)得到肯定，但由于技術(shù)原因蛋白質(zhì)類凝膠劑并不多見，重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）凝膠劑尚未上市。. 主要研究開發(fā)內(nèi)容. 凝膠劑處方、穩(wěn)定性、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。. 凝膠劑300例Ⅲ期臨床試驗(yàn)，重點(diǎn)與凍干粉比較觀察對(duì)新鮮創(chuàng)面的療效。. 脂質(zhì)體配方；凝膠劑生物活性保護(hù)劑與bFGF的穩(wěn)定性和生物活性的研究；多種藥效成分的協(xié)同性研究。. 脂質(zhì)體凝膠劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制，凝膠劑的生產(chǎn)工藝，樣品的制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。. 脂質(zhì)體凝膠劑的臨床前藥理毒理實(shí)驗(yàn)。. 技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn). 凝膠劑加入可與bFGF特異結(jié)合的肝素，以增強(qiáng)bFGF與受體的結(jié)合能力，并增強(qiáng)對(duì)酸、堿、熱等因素的抗性，加入肝素后，生物學(xué)活性提高至少2倍，提高了產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。. 凝膠劑處方中的卡波姆和透明質(zhì)酸的合理配比使其兼具緩釋和保濕功能。. 脂質(zhì)體主要由天然磷脂和膽固醇組成，進(jìn)入體內(nèi)后可被生物降解，不會(huì)積累在體內(nèi)，且免疫原性小。重組人bFGF包埋在脂質(zhì)體內(nèi)，從脂質(zhì)體中緩慢釋放，使藥效持續(xù)較長時(shí)間。通過細(xì)胞內(nèi)吞和融合作用，脂質(zhì)體可直接將藥物送入細(xì)胞內(nèi)，避免使用高濃度游離藥物。. 凝膠劑作為脂質(zhì)體局部給藥的載體，可在脂質(zhì)體周圍形成一道屏障控制脂質(zhì)體中藥物釋放的速率，避免藥物的突釋效應(yīng)，同時(shí)凝膠劑手感細(xì)膩，易清洗。. 擬解決的技術(shù)難點(diǎn). 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）與肝素的結(jié)合比例將影響到其生物活性，因此，通過實(shí)驗(yàn)摸索其與肝素結(jié)合的最佳比例將成為該劑型開發(fā)的重點(diǎn)工作之一。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）通過包埋于脂質(zhì)體中，將極大的提高其穩(wěn)定性，同時(shí)延長其給藥時(shí)間，提高療效。因此，脂質(zhì)體包埋技術(shù)將是該劑型開發(fā)的另一重點(diǎn)難點(diǎn)技術(shù)。. 該劑型目前研究進(jìn)展. 已經(jīng)完成了臨床前的研究，初步確定了該劑型的處方和生產(chǎn)工藝，確定了與肝素的結(jié)合比例，解決了其脂質(zhì)體包埋技術(shù)。. 已經(jīng)獲得了臨床批件，已經(jīng)完成了Ⅰ、Ⅱ期臨床試驗(yàn)，目前正在進(jìn)行Ⅲ期臨床試驗(yàn)。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）滴眼劑的研究內(nèi)容、擬解決的技術(shù)難點(diǎn)眼表疾病是我國最主要和最常見的致盲眼病之一，該病病因復(fù)雜，治療棘手，常因診治延誤導(dǎo)致愈合延遲或者不愈合，甚至致盲。重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）作用于眼表病變部位，可激活調(diào)控與修復(fù)有關(guān)細(xì)胞的增殖、移行，促進(jìn)細(xì)胞代謝、改善營養(yǎng)，主動(dòng)促進(jìn)修復(fù)，加速愈合。. 主要研究開發(fā)內(nèi)容. 滴眼劑的處方：采用MTT法分別考察所用輔料對(duì)bFGF穩(wěn)定性和生物活性的影響；采用正交試驗(yàn)考察藥效成分與輔料之間的協(xié)同性研究。. 滴眼液的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制：通過試驗(yàn)確定常規(guī)制備方法是否能滿足滴眼劑外觀形狀的要求；采用澄明度檢測(cè)儀檢測(cè)澄明度，并進(jìn)行無菌檢測(cè)；參照凍干粉劑的檢定規(guī)程，摸索滴眼劑的活性測(cè)定方法。. 滴眼劑的臨床前研究：藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)；毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)；藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。. 擬解決的技術(shù)難點(diǎn). 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）是不穩(wěn)定的活性多肽，需要通過大量的結(jié)構(gòu)和功能研究確定突變點(diǎn)，構(gòu)建一株高效表達(dá)的工程菌。. 尋找新型的賦形劑、保護(hù)劑、以解決滴眼劑的活性穩(wěn)定性及刺激性問題。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）外用溶液的研究內(nèi)容、擬解決的技術(shù)難點(diǎn). 主要研究內(nèi)容. 外用溶液的處方：采用MTT法分別考察所用輔料、試劑對(duì)rhbFGF的穩(wěn)定性和生物活性的影響；采用正交及均勻設(shè)計(jì)考察藥效成分與輔料之間的協(xié)同性研究。. 外用溶液的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制：通過驗(yàn)證確定常規(guī)制備方法是否能夠滿足外用溶液外觀形狀的要求；采用澄明度檢測(cè)儀檢測(cè)澄明度，并進(jìn)行無菌檢測(cè)；參照rhbFGF凍干制劑的檢定規(guī)程，摸索外用溶液的活性測(cè)定方法。. 外用溶液臨床前研究：根據(jù)現(xiàn)行的藥品注冊(cè)管理辦法，可免做藥理毒理實(shí)驗(yàn)，需按要求整理相關(guān)資料。. 臨床試驗(yàn)：根據(jù)現(xiàn)行的藥品注冊(cè)管理辦法，按治療用生物制品13類新藥進(jìn)行總例數(shù)480例的Ⅲ期臨床試驗(yàn)。. 重點(diǎn)解決的技術(shù)關(guān)鍵問題. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）新劑型開發(fā)中若保護(hù)劑選擇不當(dāng)，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)主藥活性喪失或無法檢測(cè)或刺激性大等問題，所以蛋白活性保護(hù)、檢測(cè)方法靈敏度與特異性問題尚需優(yōu)化。上述問題已經(jīng)解決。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）是不穩(wěn)定蛋白，生產(chǎn)制備過程中若操作不當(dāng)或保護(hù)劑選擇不當(dāng)，易出現(xiàn)聚合、N端降解、活性喪失等問題，從而導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量不合格，所以制備過程中重點(diǎn)提高蛋白穩(wěn)定性，并進(jìn)行長期穩(wěn)定性的考察。. 臨床試驗(yàn)研究中摸索最合理的使用劑量、時(shí)間、療程，觀察不良反應(yīng)。4. 項(xiàng)目的技術(shù)特色和水平. 成果來源及知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子是國家一類新藥，由北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司和暨南大學(xué)醫(yī)藥生物技術(shù)研發(fā)中心共同研制，并取得多項(xiàng)國家專利和國際專利。南海朗肽制藥有限公司于2003年4月通過技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式取得新藥重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子技術(shù)。南海朗肽制藥有限公司在取得重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子技術(shù)之后，于2003年建立中試車間，進(jìn)行外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子凍干制劑的生產(chǎn)和銷售。連續(xù)5年的生產(chǎn)和銷售，證明產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定、質(zhì)量可控，生產(chǎn)技術(shù)日日成熟；在小規(guī)模取得成功的基礎(chǔ)上，于2009年建立新的生產(chǎn)基地，引進(jìn)全自動(dòng)的灌裝設(shè)備，實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化生產(chǎn)，大大提高了產(chǎn)能。同時(shí)，在實(shí)現(xiàn)外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子產(chǎn)業(yè)化的過程中，以外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子為核心，研究開發(fā)出一系列的新劑型，為本項(xiàng)目的后續(xù)發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。以外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子為核心研制的一系列新劑型，包括如重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子外用凝膠劑、外用溶液劑、滴眼液等均為南海朗肽制藥有限公司擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，并且全部申請(qǐng)發(fā)明專利。. 國外技術(shù)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)1940年，Hoffman等在牛腦垂體提取物中發(fā)現(xiàn)一種能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長的物質(zhì)，70年代部分純化這些提取物，發(fā)現(xiàn)它是成纖維細(xì)胞的一種有絲分裂原(mitogen)，1975年定名為成纖維細(xì)胞生長因子（Fibroblast growth factor ，F(xiàn)GF），并初步確定了它的理化性質(zhì)。1984年Bohlen等人高度純化這種細(xì)胞因子。1985年Esch，1986年GimenezGallego分別確定堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）和酸性成纖維細(xì)胞生長因子（aFGF）的氨基酸順序。兩者不是同一基因產(chǎn)物，aFGF基因位于人的第5對(duì)染色體，bFGF基因位于第4對(duì)染色體，bFGF活性比aFGF大10100倍。Abraham等人在1986年獲得bFGF的cDNA克隆，從此bFGF的研究進(jìn)入分子生物學(xué)階段。bFGF是中胚層和神經(jīng)外胚層的致裂原，它對(duì)多種軟組織和神經(jīng)系統(tǒng)的損傷具有快速修復(fù)作用，同時(shí)它又是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子。bFGF對(duì)血管的形成、分化具有重要的誘導(dǎo)作用，因此它又可開發(fā)為保健品添加劑。，已批準(zhǔn)bFGF注射劑進(jìn)入II期臨床研究；日本武田制藥已經(jīng)投入100億日元，主要開發(fā)bFGF治療糖尿病和心血管病及胃潰瘍，目前日本武田公司bFGF外用制劑已經(jīng)上市；德國、意大利等國也在投入巨資進(jìn)行bFGF藥物研究，目前處于臨床前和臨床研究階段。. 國內(nèi)技術(shù)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)堿性成纖維細(xì)胞生長因子作為一種創(chuàng)面修復(fù)的較理想的藥物，在國內(nèi)已經(jīng)被批準(zhǔn)上市銷售。經(jīng)臨床前研究及前期臨床試驗(yàn)證實(shí)，堿性成纖維細(xì)胞生長因子是一種多元性因子，可影響上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞等多種細(xì)胞趨化和增殖作用，起到組織修復(fù)的調(diào)理作用。局部外用未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用，對(duì)人體各器官系統(tǒng)功能無損害。目前國內(nèi)自主研發(fā)的第一代外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子凍干制劑已先后在珠海億勝藥業(yè)和長春長生基因藥業(yè)產(chǎn)業(yè)化，產(chǎn)生較明顯的經(jīng)濟(jì)效益。第二代外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子凍干制劑在南海朗肽制藥公司和北京雙鷺制藥公司進(jìn)行生產(chǎn)。第二代外用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子與第一代外用重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子凍干制劑相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）重組蛋白是人源化的基因表達(dá)產(chǎn)物，與人體100%同源，應(yīng)用于人體具有免疫原性和致敏性低。（2）采用大腸桿菌溫控表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)，與第一代采用IPTG誘導(dǎo)型表達(dá)載體相比，大大降低了生產(chǎn)成本，具有極強(qiáng)的市場競爭力。（3）在純化工藝上肝素親和層析和凝膠層析，每升發(fā)酵產(chǎn)物可得重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子約50mg，純化收率70%左右，純度≥98%，比活性可達(dá)1107，技術(shù)達(dá)到國際領(lǐng)先水平。. 項(xiàng)目技術(shù)特點(diǎn)以及與現(xiàn)有技術(shù)或工藝比較具有的優(yōu)勢(shì)：. 基因來源于東方人血紅細(xì)胞，采用RTPCR方法直接克隆人的bFGF基因。. 鑒于遺傳密碼有兼并性和大腸桿菌對(duì)氨基酸密碼子的偏愛與人體細(xì)胞的差異，本項(xiàng)目在不改變產(chǎn)物人bFGF的氨基酸組成與排列順序的基礎(chǔ)上，選用大腸桿菌偏愛密碼子，提高了bFGF基因在大腸桿菌中的表達(dá)水平。. 重組蛋白是人源化的基因表達(dá)產(chǎn)物，與人體100%同源，應(yīng)用于人體具有免疫原性和致敏性低等優(yōu)點(diǎn)。. 本項(xiàng)目產(chǎn)品與傳統(tǒng)的創(chuàng)面治療藥物相比較均由的優(yōu)越性. 作用原理不同常規(guī)用于治療創(chuàng)傷、潰瘍的藥物多數(shù)是從消炎殺菌、抗傷口感染入手，利用人體自身的再生育和能力，來達(dá)到治療效果；而重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子則是通過促進(jìn)細(xì)胞的生長與增值，主動(dòng)修復(fù)傷口，一般正常愈合需要7~10天，而是用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子后則只需要5~7天，大大縮短了愈合時(shí)間，減少了激發(fā)感染機(jī)會(huì)，節(jié)省了治療費(fèi)用。. 對(duì)瘢痕形成影響不同常規(guī)藥物治療創(chuàng)傷、潰瘍由于是抗感染被動(dòng)修復(fù)過程，因而容易留下瘢痕和色素沉著；而重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子質(zhì)量創(chuàng)傷、潰瘍由于是主動(dòng)修復(fù)過程，愈合時(shí)間段，因而可有效減少瘢痕形成和色素沉著。. 對(duì)功能恢復(fù)的影響不同常規(guī)治療創(chuàng)傷、潰瘍，多半僅限于傷口愈合，但對(duì)受損傷的皮膚附屬功能器官，如神經(jīng)末銷、血管、汗腺等的功能恢復(fù)不是十分有效；二重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子是一種多功能細(xì)胞生長因子，對(duì)神經(jīng)元、血管等有保護(hù)和修復(fù)效果，因而使用重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子治療創(chuàng)傷、潰瘍除了有傷口快速愈合之外，更重要的是對(duì)受損的皮膚附屬供呢個(gè)器官，如神經(jīng)末銷、血管、汗腺等的功能恢復(fù)有顯著療效，這在目前治療各種創(chuàng)傷、燒傷的藥物中是唯一具有此功能的藥物。5. 項(xiàng)目的技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo). 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子產(chǎn)業(yè)化的主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)和水平目的蛋白表達(dá)率將在20~30%之間，產(chǎn)量可達(dá)每升培養(yǎng)物80~100mg，目的蛋白收率可達(dá)50%，純度≥98%，比活性≥1106IU/mg；凍干收率達(dá)95%以上，技術(shù)水平可達(dá)國內(nèi)先進(jìn)。新增項(xiàng)目達(dá)產(chǎn)后年平均銷售收入2億元，利潤總額6000萬元。. 重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（rhbFGF）系列制劑的研究開發(fā)的主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)和水平. 建立重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子外用凝膠和滴眼液的穩(wěn)定生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。. 完成重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子滴眼液臨床前研究，獲得臨床試驗(yàn)批件。. 獲得重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子外用凝膠