【正文】 制酶切割點(diǎn)，基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 有特殊的遺傳標(biāo)記基因，便于篩選。（分子運(yùn)輸車） 質(zhì)粒（常用）種類： λ噬菌體的衍生物動(dòng)植物病毒重難熱點(diǎn)歸納限制性內(nèi)切酶的功能黏性末端和平末端DNA連接酶與DNA聚合酶的區(qū)別載體必須具備的條件質(zhì)粒與質(zhì)體的區(qū)別常用的載體經(jīng)典例題剖析下圖表示限制酶切割某DNA的過程，從圖中可知，該限制酶能識(shí)別的堿基序列及切點(diǎn)是（ ）A．CTTAAG，切點(diǎn)在C和T之間 B．CTTAAG，切點(diǎn)在G和A之間C．GAATTC，切點(diǎn)在G和A之間 D．CTTAAC，切點(diǎn)在C和T之間【解析】 由圖不難看出該限制酶識(shí)別的堿基序列是GAATTC，切點(diǎn)是G與A之間。答案C基礎(chǔ)試題訓(xùn)練1．在基因工程中，科學(xué)家所用的“剪刀”、“針線”和“載體”分別是指( )、質(zhì)粒、DNA連接酶 、質(zhì)粒、DNA連接酶 、RNA連接酶、質(zhì)粒 、DNA連接酶、質(zhì)粒2．不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是 （ ）　　A．能復(fù)制 　　　　 　C．具有標(biāo)記基因 　 D．它是環(huán)狀DNA3．下列四條DNA分子，彼此間間具有粘性末端的一組是 （ ）T A G GC C A TT A C CG G T A ① ② ③ ④　A．①②　　　B．②③　　　C．③④　　　D．②④４．質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體，它的主要特點(diǎn)是①能自主復(fù)制 ②不能自主復(fù)制 ③結(jié)構(gòu)很小 ④蛋白質(zhì) ⑤環(huán)狀RNA ⑥環(huán)狀DNA⑦能“友好”地“借居”A．①③⑤⑦ B．①④⑥C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦５．有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是 （　 ）　　A．DNA連接酶將黏性未端的堿基對(duì)連接起來　　B．限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得　　C．目的基因須由載體導(dǎo)入受體細(xì)胞　　D．人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶６．實(shí)施基因工程第一步的一種方法是把所需的基因從供體細(xì)胞內(nèi)分離出來，這要利用限性內(nèi)切酶。一種限制性內(nèi)切酶能識(shí)別DNA子中的GAATTC順序，切點(diǎn)在G和A之間，這是應(yīng)用了酶的（?。　．高效性 　　　　C．多樣性 　?。罚藗兂＿x用的細(xì)菌質(zhì)粒分子往往帶有一個(gè)抗菌素抗性基因，該抗性基因的主要作用是 A . 提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性B. 有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測(cè)C. 增加質(zhì)粒分子的分子量D．便于與外源基因連接8．下列屬于基因運(yùn)載體所必須具有的條件是（多選） （ ）A、具有某些標(biāo)志基因B、具有環(huán)狀的DNA分子C、能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制D、具有多種限制性內(nèi)切酶9．下列哪些可作為基因工程技術(shù)中常用的基因運(yùn)載工具（多選） （ ）A．大腸桿菌 B． 質(zhì)粒C．動(dòng)物病毒 D． 線粒體 10．在重組DNA技術(shù)中，不常用到的酶是　　A、限制性內(nèi)切酶 B、DNA聚合酶　　C、DNA連接酶 D、反轉(zhuǎn)錄酶11．多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶切割后的DNA末端為　　A、平頭末端 B、3突出末端 C、5突出末端 D、粘性末端12．在基因工程中通常所使用的質(zhì)粒是　　A、細(xì)菌的染色體DNA B、細(xì)菌染色體外的DNA　　C、病毒染色體DNA D、噬菌體DNA13．（2006深圳一?？碱}）研究人員想將生長激素基因通過質(zhì)粒介導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，以表達(dá)產(chǎn)生生長激素。已知質(zhì)粒中存在兩個(gè)抗性基因：A是抗鏈霉素基因，B是抗氨芐青霉素基因，且目的基因不插入到基因A、B中，而大腸桿菌不帶任何抗性基因，則篩選獲得“工程菌”的培養(yǎng)基中的抗抗生素首先應(yīng)該A、僅有鏈霉素 B、僅有氨芐青霉素　　C、同時(shí)有鏈霉素和氨芐青霉素 D、無鏈霉素和氨芐青霉素14．（05全國Ⅰ）鐮刀型細(xì)胞貧血癥的病因是血紅蛋白基因的堿基序列發(fā)生了改變。檢測(cè)這種堿基序列改變必須使用的酶是A. 解旋酶 B. DNA連接酶 C. 限制性內(nèi)切酶 D、RNA聚合酶創(chuàng)新應(yīng)用訓(xùn)練，由于過早成熟而易腐爛。應(yīng)用基因工程技術(shù)，通過抑制某種促進(jìn)果實(shí)成熟激素的合成，可使番茄貯藏時(shí)間延長，培育成耐貯藏的番茄新品種。這種轉(zhuǎn)基因番茄已于1993年在美國上市，請(qǐng)回答：　?。?）促進(jìn)果實(shí)成熟的重要激素是 　　　。（2）在培育轉(zhuǎn)基因番茄的操作中，所用的基因的“剪刀”是　　 　　　，基因的“針線”是　　 　　　　，基因的“運(yùn)輸工具”是　　　　　　　?！　。?）與雜交育種、誘變育種相比，通過基因工程來培育新品種的主要優(yōu)點(diǎn)是　　　　　　、　　　 　　　　　和　　　　 　　　　　。（05天津理綜）限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有一個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)。（1）請(qǐng)畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。（2）請(qǐng)畫出目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。（3）在DNA連接酶作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？為什么？2 基因工程的基本操作程序課標(biāo)要求簡(jiǎn)述基因工程的原理和技術(shù)能力要求（1）通過對(duì)書中插圖、照片等的觀察，學(xué)會(huì)科學(xué)的觀察方法，培養(yǎng)觀察能力。（2）通過對(duì)基因工程的基本操作程序的學(xué)習(xí)，使學(xué)生在理解步驟的同時(shí)，舉一反三，對(duì)于其他基因工程操作實(shí)例做到能理解、能介紹，從而培養(yǎng)學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)的理解能力及良好的語言表達(dá)能力。（3）通過引導(dǎo)學(xué)生在網(wǎng)上的探究活動(dòng)，引導(dǎo)學(xué)生主動(dòng)參與，樂于探究，培養(yǎng)學(xué)生收集和處理科學(xué)信息的能力、獲取新知識(shí)的能力、分析和解決問題的能力及交流與合作的能力。知識(shí)網(wǎng)絡(luò)體系 目的基因：指編碼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因 　　 　　基因文庫 　　　　從基因文庫中獲取 基因組文庫目的基因的獲取 方法 　 　 部分基因文庫　　　　　　　　　　　　人工合成 PCR：是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定　　　　　　　　　　　　　　　DNA片段的核酸合成技術(shù)。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 目的：獲取大量的目的基因原理：DNA復(fù)制 過程 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，基因表達(dá)載體的構(gòu)建 并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。（基因工程的核心） 目的基因：基因表達(dá)載體的組成： 啟動(dòng)子： 終止子： 標(biāo)記基因： 轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法： 基因槍法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 方法： 花粉通道法 導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的方法： 顯微注射技術(shù) 導(dǎo)入微生物的方法： 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體上是否插入了目的基因 檢測(cè)： 方法：分子雜交技術(shù)（DNA探針+轉(zhuǎn)基因生物DNA）目的基因的檢測(cè)和鑒定 檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄 方法：分子雜交技術(shù)（DNA探針+轉(zhuǎn)基因生物mRNA）檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 抗原—抗體雜交 鑒定：對(duì)生物進(jìn)行個(gè)體水平的鑒定重難熱點(diǎn)歸納提取目的基因的方法目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的途徑。知識(shí)拓展1．外顯子與內(nèi)含子一般來說，結(jié)構(gòu)基因都是由外顯子和內(nèi)含子組成，但是，外顯子和內(nèi)含子的關(guān)系不是完全固定不變的。有時(shí)同一條DNA鏈上的某一段DNA序列，當(dāng)它作為編碼某多肽鏈的基因時(shí)是外顯子，而作為編碼另一多肽鏈的基因時(shí)，則是內(nèi)含子，結(jié)果是同一基因可以同時(shí)轉(zhuǎn)錄為兩種或兩種以上的mRNA。2．原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)的異同點(diǎn)原核細(xì)胞的基因真核細(xì)胞的基因不同點(diǎn)編碼區(qū)連續(xù)；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單編碼區(qū)有間隔，不連續(xù)；結(jié)構(gòu)復(fù)雜相同點(diǎn)都有編碼區(qū)和非編碼區(qū)；編碼區(qū)都有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列；編碼區(qū)上游都有與RNA聚合酶結(jié)合的位點(diǎn)3．獲取目的基因的方法從基因文庫中獲取鳥槍法人工合成3．目的基因與運(yùn)載體結(jié)合（以質(zhì)粒為運(yùn)載體）4．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞受體細(xì)胞：細(xì)菌 ↓氯化鈣細(xì)胞壁的通透性增大↓重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞↓目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制經(jīng)典例題剖析［例1］下列有關(guān)基因工程技術(shù)的正確敘述是A．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運(yùn)載體B．所有的限制酶都只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列C．選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D．只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)【解析】 基因操作的工具有限制酶、連接酶，一種限制酶只能識(shí)別特定的核苷酸序列。運(yùn)載體是基因的運(yùn)輸工具，目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，受體細(xì)胞表現(xiàn)出特定的性狀，才說明目的基因完成了表達(dá)，基因工程的結(jié)果是讓目的基因完成表達(dá)，生產(chǎn)出目的基因的產(chǎn)物，選擇受體細(xì)胞的重要條件就是能夠快速繁殖?！敬鸢浮?C［例2］應(yīng)用基因工程技術(shù)診斷疾病的過程中必須使用基因探針才能達(dá)到探測(cè)疾病的目的?；蛱结樖侵窤．用于檢測(cè)疾病的醫(yī)療器械B．用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子C．合成β—球蛋白的DNAD．合成苯丙羥化酶DNA片段【解析】 基因診斷是用放射性同位素、熒光分子等標(biāo)記的DNA作探針，利用DNA分子雜交原理，鑒定被檢測(cè)標(biāo)本上的遺傳信息，達(dá)到檢測(cè)疾病的目的?；A(chǔ)試題訓(xùn)練構(gòu)建基因組DNA文庫時(shí)，首先雷分離細(xì)胞的A、染色體DNA B、線粒體DNA C、總mRNA D、tRNA2．在基因工程中，把選出的目的基因（共1000個(gè)脫氧核苷酸對(duì)，其中腺嘌嶺脫氧核苷酸是460個(gè)）放入DNA擴(kuò)增儀中擴(kuò)增4代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個(gè)數(shù)是( ) 2．在基因工程中，科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是（ ） ，操作方便 C. 繁殖速度快 ，變異少3．因工程的操作步驟：①使目的基因與運(yùn)載體相結(jié)合，②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，③檢測(cè)目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀要求，④提取目的基因，正確的操作順序是（?。　．③②④① 　　B.②④①③ 　C．④①②③ 　D．③④①②4．工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 （?。　．人工合成基因 　　　　 　B．目的基因與運(yùn)載體結(jié)合　　C．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D．目的基因的檢測(cè)和表達(dá)5．就分于結(jié)構(gòu)而論，質(zhì)粒是　　A、環(huán)狀雙鏈DNA分子 B、環(huán)狀單鏈DNA分于C、環(huán)狀單鏈RNA分子 D、線狀雙鏈DNA分子6．聚合酶鏈反應(yīng)可表示為A、PEC B、PER C、PDR D、PCR7．在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是　　A、化學(xué)合成法 B、基因組文庫法C、CDNA文庫法 D、聚合酶鏈反應(yīng)8．有關(guān)基因工程的敘述正確的是 （　 ）　　　　　　　　9．不屬于目的基因與運(yùn)載體結(jié)合過程的是 （ ）A．用一定的限制酶切割質(zhì)粒露出黏性末端B．用同種限制酶切割目的基因露出黏性末端　　C. 將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增　　D．將切下的目的基因插入到質(zhì)粒切口處10．科學(xué)家通過基因工程的方法，能使馬鈴薯塊莖含有人奶蛋白。以下有關(guān)該基因工程的敘述錯(cuò)誤的是 A．采用反轉(zhuǎn)錄的方法得到的目的基因 B．基因非編碼區(qū)對(duì)于目的基因在塊莖中的表達(dá)是不可缺少的