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微生物學(xué)考研筆記-文庫(kù)吧

2025-03-23 03:30 本頁(yè)面


【正文】 端生。螺旋菌:菌體回轉(zhuǎn)如螺旋,螺旋滿(mǎn)2—6環(huán),螺旋數(shù)目和螺距大小因種而異。鞭毛二端生。細(xì)胞壁堅(jiān)韌,菌體較硬。螺旋體:菌旋轉(zhuǎn)周數(shù)在6環(huán)以上,菌體柔軟,用于運(yùn)動(dòng)的類(lèi)似鞭毛的軸絲位于細(xì)胞外鞘內(nèi)。其它形狀1)柄桿菌(prosthecate bacteria)細(xì)胞上有柄(stalk)、菌絲(hyphae)、附器(appendages)等細(xì)胞質(zhì)伸出物,細(xì)胞呈桿狀或梭狀,并有特征性的細(xì)柄。一般生活在淡水中固形物的表面,其異常形態(tài)使得菌體的表面積與體積之比增加,能有效地吸收有限的營(yíng)養(yǎng)物;2)星形細(xì)菌(starshaped bacteria )3)方形細(xì)菌(squareahaped bacteria)4)異常形態(tài)(畸形,衰頹型) 環(huán)境條件的變化: 正常形態(tài)物理、化學(xué)因子的刺激 阻礙細(xì)胞正常發(fā)育 環(huán)境條件恢復(fù)正常培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 細(xì)胞衰老 營(yíng)養(yǎng)缺乏 異常形態(tài) 自身代謝產(chǎn)物積累過(guò)多常用的染色方法簡(jiǎn)單染色法 正染色 革蘭氏染色法 鑒別染色法 抗酸性染色法 死菌 芽孢染色法 姬姆薩染色法細(xì)菌染色法 負(fù)染色: 莢膜染色法等 活菌:用美藍(lán)或TTC(氧化三苯基四氮唑)等作活菌染色(二)大小范圍一般細(xì)菌的大小范圍:測(cè)量單位——um(微米)球菌: ~ 1 um (直徑)桿菌:~ 1 um (直徑) X 1~ 80 um(長(zhǎng)度)螺旋菌:~ 1 um (直徑) X 1~ 50 um(長(zhǎng)度)(長(zhǎng)度是菌體兩端點(diǎn)之間的距離,而非實(shí)際長(zhǎng)度)測(cè)量方法顯微鏡測(cè)微尺;顯微照相后根據(jù)放大倍數(shù)進(jìn)行測(cè)算細(xì)菌大小測(cè)量結(jié)果的影響因素個(gè)體差異;干燥、固定后的菌體會(huì)一般由于脫水而比活菌體縮短1/31/4;染色方法的影響,一般用負(fù)染色法觀(guān)察的菌體較大;幼齡細(xì)菌一般比成熟的或老齡的細(xì)菌大;環(huán)境條件,如培養(yǎng)基中滲透壓的改變也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞大小的變化。(三)構(gòu)造一般構(gòu)造:一般細(xì)菌都有的構(gòu)造特殊構(gòu)造:部分細(xì)菌具有的或一般細(xì)菌在特殊環(huán)境下才有的構(gòu)造細(xì)胞壁(cell wall)(1)概念:是緊貼細(xì)胞質(zhì)膜外側(cè)的一層厚實(shí)、堅(jiān)韌的外被。(2)證實(shí)細(xì)胞壁存在的方法:1)細(xì)菌超薄切片的電鏡直接觀(guān)察;2)質(zhì)、壁分離與適當(dāng)?shù)娜旧?,可以在光學(xué)顯微鏡下看到細(xì)胞壁;3)機(jī)械法破裂細(xì)胞后,分離得到純的細(xì)胞壁;4)制備原生質(zhì)體,觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)的變化;(3)細(xì)胞壁的功能:1)固定細(xì)胞外形和保護(hù)細(xì)胞免受外力損傷;2)為細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂和鞭毛運(yùn)動(dòng)所必需;3)滲透屏障,阻攔酶蛋白和某些抗生素等大分子物質(zhì)(分子量大于800)進(jìn)入細(xì)胞;4)細(xì)菌特定的抗原性、致病性以及對(duì)抗生素和噬菌體的敏感性的物質(zhì)基礎(chǔ);(4)革蘭氏染色、細(xì)胞壁的化學(xué)組成與結(jié)構(gòu):革蘭氏染色法1)結(jié)晶紫初染2)碘溶液媒染3)乙醇脫色4)沙黃復(fù)染:革蘭氏陰性細(xì)菌呈紅色,革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌呈深紫色G+菌:?jiǎn)螌?,厚?0~25nm),組分簡(jiǎn)單,90%肽聚糖(含量高,交聯(lián)緊密),10%磷壁酸G菌:多層,?。?0~15nm),組分復(fù)雜,內(nèi)壁層:肽聚糖(含量低,交聯(lián)疏松),外膜有脂多糖、磷脂、脂蛋白 1)G+細(xì)菌的細(xì)胞壁G+細(xì)菌的細(xì)胞壁特點(diǎn):厚度大(20~25nm)化學(xué)組分簡(jiǎn)單,一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。 肽聚糖(peptidoglycan):又稱(chēng)粘肽(mucopeptide)、胞壁質(zhì)(murein)或粘質(zhì)復(fù)合物G+細(xì)菌的細(xì)胞壁 (mucoplex),是真細(xì)菌細(xì)胞壁中的特有成分。 磷壁酸(teichoic acid):又稱(chēng)“垣酸”,結(jié)合在革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁上一種酸性多糖A、肽聚糖:厚約20~25nm,由40層左右的網(wǎng)格狀分子交織成的網(wǎng)套覆蓋在整個(gè)細(xì)胞上。 (N—乙酰胞壁酸——原核生物所特有的已糖)肽聚糖單體由三部分組成:雙糖單位 四肽尾 肽 橋雙糖單位中的β1,4糖苷鍵很容易被溶菌酶(lysozyme)所水解,從而引起細(xì)菌因肽聚糖細(xì)胞壁的“散架”而死亡。由四個(gè)氨基酸分子按L型與D型交替方式連接而成。D型氨基酸和DAP可保護(hù)肽聚糖免受肽酶的水解。肽橋:短肽尾中的第四個(gè)氨基酸殘基D丙氨酸的羧基通過(guò)肽鍵與相鄰另一短肽尾中的第三個(gè)氨基酸的氨基相連。但有些細(xì)菌的肽橋不是兩個(gè)短肽尾直接的連接,而是通過(guò)一個(gè)短肽作為肽橋連接于兩條短肽尾的氨基酸之間,例如金黃色葡萄球菌中的短肽為5個(gè)甘氨酸殘基組成。大部分革蘭氏陰性菌中的肽橋不需要短肽而直接通過(guò)D丙氨酸和堿性氨基酸的氨基相連而成。 目前所知的肽聚糖已超過(guò)100種,在這一“肽聚糖的多樣性”中,主要的變化發(fā)生在肽橋上。B、磷壁酸:革氏陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁上特有的化學(xué)成分(酸性多糖) 按成分分為 甘油磷酸 核糖醇磷酸按結(jié)合部位分為 壁磷壁酸 膜磷壁酸壁磷壁酸,它與肽聚糖分子間進(jìn)行共價(jià)結(jié)合(以末端磷酸二酯鍵連接在M第6位碳原子上),含量會(huì)隨培養(yǎng)基成分而改變,一般占細(xì)胞壁重量的10%,有時(shí)可接近50%。用稀酸或稀堿可以提取。跨越肽聚糖層并與細(xì)胞膜相交聯(lián)的膜磷壁酸(又稱(chēng)脂磷壁酸),由甘油磷酸鏈分子與細(xì)胞膜上的磷脂進(jìn)行共價(jià)結(jié)合后形成。其含量與培養(yǎng)條件關(guān)系不大??捎?5%熱酚水提取,也可用熱水從脫脂凍干細(xì)菌中提取。磷壁酸的主要生理功能(自學(xué)):p19細(xì)胞壁形成負(fù)電荷環(huán)境,增強(qiáng)細(xì)胞膜對(duì)二價(jià)陽(yáng)離子的吸收,提高膜結(jié)合酶的活力;二價(jià)陽(yáng)離子,特別是高濃度的Mg2+。的存在,對(duì)于保持膜的硬度,提高細(xì)胞膜上需Mg2+的合成酶的活性極為重要。貯藏磷元素;增強(qiáng)某些致病菌對(duì)宿主細(xì)胞的粘連、避免被白細(xì)胞吞噬以及抗補(bǔ)體的作用;革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌特異表面抗原的物質(zhì)基礎(chǔ); 可作為細(xì)菌分類(lèi)、鑒定的依據(jù)噬菌體的特異性吸附受體;能調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)自溶素(autolysin)的活力而調(diào)節(jié)細(xì)胞壁的增長(zhǎng),防止細(xì)胞因自溶而死亡。C、細(xì)胞壁中含有一些特殊成分的革氏陽(yáng)性細(xì)菌大部分G+細(xì)菌細(xì)胞壁含脂量很低,但棒桿菌屬、分支桿菌屬諾卡氏菌屬的細(xì)胞壁卻含有豐富的稱(chēng)為分支菌酸(Mycolic acid)的枝鏈羥基脂質(zhì): R1— CH—CH—COOH R1, R2為很長(zhǎng)的碳?xì)滏? OH R2 分支菌酸與肽聚糖復(fù)合在一起。分支桿菌具有抗酸染色的特性,是由于細(xì)胞壁中含分支菌酸的緣故。 分支菌酸被認(rèn)為與這些細(xì)菌(白喉棒桿菌,結(jié)核分支桿菌)的致病性有關(guān)。用抗酸性染色(一種鑒別染色技術(shù))對(duì)宿主體內(nèi)的分枝桿菌病原體(紅色,非抗酸性細(xì)菌呈蘭色)進(jìn)行檢測(cè)A族鏈球菌細(xì)胞壁中有特異性的M蛋白,它有抗吞噬作用。大多數(shù)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)細(xì)胞壁中有葡萄球菌A蛋白(SPA),它與肽聚糖共價(jià)結(jié)合,對(duì)胰酶敏感,有抗吞噬和抗噬菌體的作用。2)革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁A、肽聚糖(參見(jiàn)P16)埋藏在外膜層之內(nèi),是僅由1~2層肽聚糖網(wǎng)狀分子組成的薄層(2~3nm),含量約占細(xì)胞壁總重的10%,故對(duì)機(jī)械強(qiáng)度的抵抗力較革蘭氏陽(yáng)性菌弱。革蘭氏陽(yáng)性菌與陰性菌肽聚糖結(jié)構(gòu)的差別:沒(méi)有特殊的肽橋,只形成較為疏稀、機(jī)械強(qiáng)度較差的肽聚糖網(wǎng)套內(nèi)消旋二氨基庚二酸(mDAP)(只在原核微生物細(xì)胞壁上發(fā)現(xiàn))肽聚糖只存在于真細(xì)菌中,古生菌和真核生物細(xì)胞壁中沒(méi)有肽聚糖。D谷氨酸、D丙氨酸、mDAP在蛋白質(zhì)中未出現(xiàn)過(guò)。B、外膜(outer membrane)(參見(jiàn)P19)又稱(chēng)外壁層,位于革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外層,可分為內(nèi)、中、外三層,從內(nèi)到外由脂蛋白、磷脂和脂多糖等若干種蛋白質(zhì)組成的膜。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)位于細(xì)胞壁最外層的一層較厚的類(lèi)脂多糖類(lèi)物質(zhì)(相對(duì)分子質(zhì)量在1 0000以上)由三部分組成:類(lèi)脂A(內(nèi)毒素的主要成分)、核心多糖、O特異側(cè)鏈(O多糖,O抗原)O特異側(cè)鏈糖的種類(lèi)、順序和空間構(gòu)型是菌株特異的,是抗原特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)KDO:2酮3脫氧辛糖酸;Hep:L甘油D甘露庚糖;Man:甘露糖;Rha:鼠李糖;Gal:半乳糖;Abe:阿可比糖LPS層的主要功能:1)LPS結(jié)構(gòu)的多變,決定了革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞表面抗原決定簇的多樣性;根據(jù)LPS抗原性的測(cè)定,沙門(mén)氏菌(Salmonella)的抗原型多達(dá)2107種,一般都源自O(shè)特異側(cè)鏈種類(lèi)的變化。這種多變性是革蘭氏陰性細(xì)菌躲避宿主免疫系統(tǒng)攻擊,保持感染成功的重要手段。也可依此用靈敏的血清學(xué)方法對(duì)病原菌進(jìn)行鑒定,在傳染病的診斷中有其重要意義。2)LPS負(fù)電荷較強(qiáng),與磷壁酸相似,也有吸附Mg2+、Ca2+等陽(yáng)離子以提高其在細(xì)胞表面濃度的作用,對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)起穩(wěn)定作用。3)類(lèi)脂A是革蘭氏陰性細(xì)菌致病物質(zhì)——內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ);4)具有控制某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞的部分選擇性屏障功能;5)許多噬菌體在細(xì)胞表面的吸附受體;外膜蛋白(outer membrane protein) 嵌合在LPS和磷脂層外膜上的蛋白。有20余種,但多數(shù)功能尚不清楚??椎鞍祝╬orins)是由三個(gè)相同分子量(36000)蛋白亞基組成的一種三聚體跨膜蛋白,中間有一直徑約1nm的孔道,通過(guò)孔的開(kāi)、閉,可對(duì)進(jìn)入外膜層的物質(zhì)進(jìn)行選擇。非特異性孔蛋白:可通過(guò)分子量小于800~900的任何親水性分子特異性孔蛋白:只容許一種或少數(shù)幾種相關(guān)物質(zhì)通過(guò),如維生素B12和核苷酸等。脂蛋白(lipoprotein)是一種通過(guò)共價(jià)鍵使外膜層牢固地連接在肽聚糖內(nèi)壁層上的蛋白,分子量約為7200。C、周質(zhì)空間(periplasmic space, periplasm),又稱(chēng)壁膜間隙在革蘭氏陰性細(xì)菌中,一般指其外膜與細(xì)胞膜之間的狹窄空間(寬約12~15nm),呈膠狀。周質(zhì)空間是進(jìn)出細(xì)胞的物質(zhì)的重要中轉(zhuǎn)站和反應(yīng)場(chǎng)所。在周質(zhì)空間中,存在著多種周質(zhì)蛋白(periplasmic proteins):水解酶類(lèi);合成酶類(lèi);結(jié)合蛋白;受體蛋白;D. 粘合位點(diǎn):P19革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的許多部位,外膜與質(zhì)膜直接接觸,是加固革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁并支撐外膜的另一結(jié)構(gòu)。 有人認(rèn)為物質(zhì)可通過(guò)粘合位點(diǎn)進(jìn)入細(xì)胞而不必穿越周周空間。革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌一系列生物學(xué)特性的比較(參見(jiàn)周德慶P16)3)革蘭氏染色原理革蘭氏染色的陽(yáng)性或陰性,與細(xì)胞的物理結(jié)構(gòu)有關(guān)。細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與革蘭氏染色的關(guān)系 革氏陽(yáng)性菌革氏陰性菌肽聚糖含量高,交聯(lián)密含量低,交聯(lián)疏松脂類(lèi)一般無(wú)含量高乙醇作用脫水作用脂溶作用孔徑縮小,結(jié)構(gòu)更緊密孔徑增大,結(jié)構(gòu)變得疏松大分子復(fù)合物滯留大分子復(fù)合物溶出結(jié)果紫色紅色(5)細(xì)胞壁缺陷細(xì)菌:(參見(jiàn)P21) 自發(fā)突變——L型細(xì)菌 實(shí)驗(yàn)室或宿主體內(nèi)形成 基本去盡——原生質(zhì)體(G+) 人工去壁缺壁細(xì)菌 部分去除——球狀體(G)在自然界長(zhǎng)期進(jìn)化中形成——枝原體1)L型細(xì)菌(Lform of bacteria)細(xì)菌在某些環(huán)境條件下(實(shí)驗(yàn)室或宿主體內(nèi))通過(guò)自發(fā)突變而形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷變異型。因英國(guó)李斯德(Lister)預(yù)防研究所首先發(fā)現(xiàn)而得名(1935年,念珠狀鏈桿菌 Streptobacillus moniliformis)大腸桿菌、變形桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、分枝桿菌和霍亂弧菌等20多種細(xì)菌中均有發(fā)現(xiàn),被認(rèn)為可能與針對(duì)細(xì)胞壁的抗菌治療有關(guān)。特點(diǎn):沒(méi)有完整而堅(jiān)韌的細(xì)胞壁,細(xì)胞呈多形態(tài);有些能通過(guò)細(xì)菌濾器,故又稱(chēng)“濾過(guò)型細(xì)菌”;對(duì)滲透敏感,在固體培養(yǎng)基上形成“油煎蛋”似的小菌落();2)原生質(zhì)體(protoplast)在人為條件下,用溶菌酶處理或在含青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)而抑制新生細(xì)胞壁合成而形成的僅由一層細(xì)胞膜包裹的,圓球形、對(duì)滲透壓變化敏感的細(xì)胞,一般由革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌形成。特點(diǎn):對(duì)環(huán)境條件變化敏感,低滲透壓、振蕩、離心甚至通氣等都易引起其破裂;有的原生質(zhì)體具有鞭毛,但不能運(yùn)動(dòng),也不被相應(yīng)噬菌體所感染;在適宜條件(如高滲培養(yǎng)基)可生長(zhǎng)繁殖、形成菌落,形成芽孢。及恢復(fù)成有細(xì)胞壁的正常結(jié)構(gòu);比正常有細(xì)胞壁細(xì)菌更易導(dǎo)入外源遺傳物質(zhì),是研究遺傳規(guī)律和進(jìn)行原生質(zhì)體育種良好實(shí)驗(yàn)材料。3)球狀體(sphaeroplast) ,又稱(chēng)原生質(zhì)球采用上述同樣方法,針對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌處理后而獲得的殘留部分細(xì)胞壁(外壁層)的球形體。與原生質(zhì)體相比,它對(duì)外界環(huán)境具有一定的抗性,可在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。4)支原體(Mycoplasma)在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的、適應(yīng)自然生活條件的無(wú)細(xì)胞壁的原核生物。因它的細(xì)胞膜中含有甾醇(一般原核生物沒(méi)有),所以即使缺乏細(xì)胞壁,其細(xì)胞膜仍有較高的機(jī)械強(qiáng)度。青霉素的殺菌作用
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