[理學(xué)]第九章 核酸代謝-文庫吧
2025-03-07 06:40 本頁面
【正文】 ate)：解開成單鏈的 DNA母鏈； ? 引物 (primer)：提供 3180。OH末端的寡核苷酸； ? 其他的酶和蛋白質(zhì)因子： DNA解鏈酶 (helicase) 、DNA旋轉(zhuǎn)酶 (gyrase)、 引物酶 (primase)和引發(fā)體 (primosome)、 DNA連接酶 (ligase)、 單 鏈結(jié)合蛋白 (singlestrand binding protein,SSB)。 (1)引物酶 ? 已知的任何一種 DNA聚合酶都不能從頭合成一條新 DNA鏈， DNA的合成需要一段引物。 ? 大多數(shù)細(xì)胞中引物為 RNA，合成這些引物的酶稱為引物酶。 ? 引物酶以單鏈 DNA為模板， NTP為底物合成 RNA。 (2) DNA聚合酶 ? 以四種 dNTP為底物，在 DNA模板的指令下，按照堿基互補(bǔ)配對的原則，把 dNTP逐個添加到引物或延伸鏈的 3’－ OH末端，形成 3’,5’磷酸二酯鍵。新合成的鏈按 5’→ 3’方向進(jìn)行延伸。 ? DNA聚合酶 Ⅰ ?可以催化 DNA鏈的延長（ 5’ →3’ 聚合） ?由 5’端水解 DNA鏈（ 5’→3’ 核酸外切酶活性） ?由 3’端水解 DNA鏈（ 3’ →5’ 核酸外切活性）校對 ? DNA聚合酶 Ⅱ ： 多亞基酶，聚合作用，但聚合活力很低；具有 3’→ 5’外切酶活性。 ? DNA聚合酶 Ⅲ ：真正起復(fù)制作用的酶 ?由 10種亞基組成的不對稱二聚體 ?α、 ε和 θ構(gòu)成核心酶 ?α亞基有聚合活性 ?ε亞基有 3’→ 5’外切酶活性 (3)連接酶 ? 催化雙鏈 DNA切口上 5’P與 3’OH的共價連接。 ? 連接反應(yīng)需要能量。 ? 不催化兩條游離 DNA單鏈的結(jié)合。 3553 5353HO P D N A l i g a s eN A DA T PN M NA M P + P P i′′′′′′′′+DNA連接酶在 DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過程均起重要作用。 (4)解螺旋酶（解鏈酶） ? 利用水解 ATP釋放的能量，催化雙鏈DNA解開形成單鏈。 ? 解鏈酶一般是多聚體的，最常見的是六聚體的形式。 (5)單鏈結(jié)合蛋白（ SSB） ? 穩(wěn)定已被解開的 DNA單鏈，阻止復(fù)性和保護(hù)單鏈不被核酸酶降解。 (6)拓?fù)洚悩?gòu)酶 （旋轉(zhuǎn)酶） ? 兼有內(nèi)切酶和連接酶的活力， 既能水解，又能連接磷酸二酯鍵 。 ? Ⅰ 型拓?fù)洚悩?gòu)酶：使 DNA一條鏈斷裂和再連接 ? Ⅱ 型拓?fù)洚悩?gòu)酶：使 DNA兩條鏈斷裂和再連接 ← 旋轉(zhuǎn)酶 (3)規(guī)律 ① DNA復(fù)制是半保留的； ② DNA復(fù)制必須在特定的位點開始，這樣的位點稱為復(fù)制起始點 (origin, ori)，原核生物只有一個復(fù)制起始點；真核生物染色體 DNA有多個復(fù)制起始點，同時形成多個復(fù)制單位，兩個起始點之間的 DNA片段稱為 復(fù)制子 (replicon)P317。 ③ DNA復(fù)制可以是單向的，也可以是雙向的 ,后者更常見； 原核生物的復(fù)制從一個起始點開始，同時向兩個方向進(jìn)行，稱為雙向復(fù)制，復(fù)制中的 DNA成為 ?狀 ④兩條 DNA鏈的合成都是朝5’→3 ’方向進(jìn)行； ⑤ DNA復(fù)制嚴(yán)格遵守堿基互補(bǔ)配對原則，準(zhǔn)確復(fù)制； ⑥ 復(fù)制是半不連續(xù)的，前導(dǎo)鏈?zhǔn)沁B續(xù)合成的，隨后鏈?zhǔn)遣贿B續(xù)合成的，通過連接酶把若干片段連接起來； ⑦各個短片段開始復(fù)制時，都需要 RNA引物； ⑧復(fù)制有多種機(jī)制，會因環(huán)境的不同 (酶的豐度、溫度、營養(yǎng)條件等 )而有不同的起始機(jī)制及鏈的延長方式。 (大腸桿菌 )P307 分為三個階段： (1)起始 (initiation) ——RNA引物的合成 (2)延長 (elongation) ——向 RNA引物 3’端添加 dNTP，合成 DNA短的片段 (3)終止 (termination)——RNA引物脫落，代替相應(yīng)的 DNA序列，通過共價鍵連接短片段，形成 DNA片段。 (1)起始 ? DNA解成單鏈 :由旋轉(zhuǎn)酶松弛超螺旋，解鏈酶解開雙鏈， SSB結(jié)合到單鏈上使其穩(wěn)定。 解鏈酶 ? 引物合成：引發(fā)
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