飼料中三聚氰氨的測定-文庫吧
2025-01-03 20:43 本頁面
【正文】 方法的性能檢驗 ?實際樣品的檢測 提取條件的確定 ? 美國 FDA實驗室方法，氣相色譜質譜法采用甲醇提取，由于三聚氰胺在甲醇中溶解度很低，因此， FDA只將其作為定性篩選法，而其高效液相色譜法由于沒有凈化過程，對于基質復雜的飼料中三聚氰胺的測定效果不理想。 ? 我們主要采用中國檢科院的提取凈化方法 ? 主要改進在于提取時加入乙酸鉛溶液去除蛋白，而對于脂肪含量較高的寵物食品 (罐頭 )由于三聚氰胺在乙醚中不溶，采用乙醚脫脂后提取，獲得了滿意的結果，而且提取方法簡單，而對于寵物食品（干糧），稱取在索式提取器中用乙醚回流 6h去除脂肪，由于溫度高、時間長，回收率只有4060%，而直接用 1％的三氯乙酸溶液提取，回收率高于80%。 提取條件的確定 ? 本方法確定的提取條件 ?植物蛋白、飼料和寵物飼料（干糧）中三聚氰胺的提?。悍Q取 5g樣品（精確至 ），準確加入 50mL1％的三氯乙酸溶液，準確加入 2mL飽和醋酸鉛溶液。搖勻，超聲提取20min。靜止 2min，取提取液約 30mL轉入離心管，在10000rpm離心機上離心 5min。 ?寵物飼料（ 罐頭 ）： 稱取 5g樣品（精確至 ），加入50mL乙醚，搖床上 120轉 /分震蕩 1小時，棄去乙醚，再加入 50mL乙醚，搖床上 120轉 /分震蕩 1小時，棄去乙醚，其余步驟同上。 凈化條件的選擇 ?我們主要采用中國檢科院的提取凈化方法，使用了不同的凈化柱試驗了樣品的凈化效果。 ?我們對比了 OASIS MCX柱、 PCX和 LC18等幾種固相萃取柱，結果 LC18由于三聚氰胺難以保留，樣品添加沒有回收。只有 OASIS MCX和 PCX柱達到了良好的回收，回收率大于 80%。 ?我們確定的凈化條件為：固相萃取柱活化和上樣：分別用3ml甲醇， 3ml水活化柱，準確移取 10mL離心液分次上柱。再用 3ml水和 3ml甲醇洗滌固相萃取柱柱，抽近干后用 5％氨水甲醇溶液（ ） 3ml洗脫。洗脫液于氮吹儀上 50℃ 氮吹至干，用 2+8甲醇水定容，過 ?m濾膜，濾液用于液相色譜測定。 mi n0 2 4 6 8 10mA U 5 0050100150200 D A D 1 A , S i g = 2 4 0 , 4 R e f = o f f ( 0 7 0 5 1 7 \ ME L A M0 3 1 . D )mi n0 2 4 6 8 10mA U 1 5 0 1 0 0 5 0050100150200 D A D 1 A , S i g = 2 4 0 , 4 R e f = o f f ( 0 7 0 5 1 7 \ ME L A M0 5 7 . D )儀器條件的選擇 ?HPLC條件的優(yōu)化 HPLC條件的優(yōu)化 ?流動相和色譜柱的選擇 ?檢測波長的選擇 流動相和色譜柱的選擇 ?根據(jù)有關文獻，我們分別采用乙腈：（ 10mM庚烷磺酸鈉，10mM檸檬酸緩沖液） 10： 90、乙腈： 10mM庚烷磺酸鈉，10mM檸檬酸緩沖液 8： 92以及乙腈：（ 10mM辛烷磺酸鈉，10mM檸檬酸緩沖液） 10： 90進行了實驗，我們發(fā)現(xiàn)采用 C8的柱子，使用乙腈：（ 10mM庚烷磺酸鈉， 10mM檸檬酸緩沖液） 10： 90 可以達到使用 C18乙腈：（ 10mM辛烷磺酸鈉，10mM檸檬酸緩沖液） 10： 90的保留水平，因此， 6min左右的保留時間既能有效的分析雜質，又能夠提高分析效率，因此，我們選用 C8色譜柱，流動相采用乙腈：（ 10mM辛烷磺酸鈉， 10mM檸檬酸緩沖液） 10： 90，得到了滿意的結果。 檢測波長的選擇 ?將 10181。g/mL的三聚氰胺標準液進樣，在二極管陣列檢測器上掃描，波長從 200nm至400nm，見圖 1，結果顯示三聚氰胺在236nm處有最大吸收，各種文獻均采用 240 nm為分析波長，因此選定 240nm為檢測波長。 nm200 220 240 260 280 300 320 340 360 380mA U020406080100120 D A D 1 , 5 . 9 9 6 (1 2 8 mA U , ) o f ME L A M0 0 6 . D方法的性能檢驗 ?HPLC方法性能檢驗 HPLC方法性能檢驗 ?標準品的線性范圍 ?最低檢測濃度 ?儀器的精密度 ?方法的準確度、精密度和適用范圍 ?方法干擾試驗 標準品的線性范圍 ?準確移取三聚氰胺標準儲備液，用提取液依次稀釋，配制成濃度為 、 、 、 、 、 ，根據(jù)三聚氰胺的濃度和峰面積的關系，繪制線性關系曲線（見圖 2）。 標準品的線性范圍 A mo u n t [ u g / ml ]0 50A r e a0202240006000800010000 me l a mi
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