電泳技術(shù)和常用電泳儀(ppt-48)-文庫(kù)吧
2025-01-03 19:09 本頁(yè)面
【正文】 （一）紙電泳 指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。 0602 平臥式電泳槽裝置示意圖 將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（ 100V～ 1000V） 進(jìn)行電泳 。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （二）醋酸纖維素薄膜電泳 電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、 電泳時(shí)間短、樣品 用量少。因此特別 適合于病理情況下 微量異常蛋白的檢測(cè)。 0603 血清蛋白的電泳圖譜 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （三）凝膠電泳 由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式，被稱為凝膠電泳。普通的凝膠電泳在板上進(jìn)行，以凝膠作為介質(zhì)。電泳中常用的凝膠為葡聚糖、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖。 它具有機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、 透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無(wú)電滲 作用、設(shè)備簡(jiǎn)單、樣品量小 (1～ 100μg ） 、分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。 0604 凝膠電泳圖 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （四）等電聚焦電泳 1． 等電聚焦電泳過(guò)程 一種利用有 pH值梯度的介質(zhì)，分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。 將等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)混合物加入有 pH值梯度的凝膠介質(zhì)中，在電場(chǎng)內(nèi)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，各組分將分別聚焦在各自等電點(diǎn)相應(yīng)的 pH值位置上，最后，樣品的各組分在各自的等電點(diǎn)聚焦成一條清晰而穩(wěn)定的窄帶。 0605 凈電荷與 PH的關(guān)系曲線 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 2．等電聚焦電泳的特點(diǎn) ①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的 pH梯度；②由于 “ 聚焦效應(yīng) ” ，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；③電泳速度快 。④ 分辨率高 。⑤ 加入樣品的位置可任意選擇；⑥可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點(diǎn) 。⑦ 適用于中、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等）生物組分的分離分析。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （ 五 ） 等速電泳 采用兩種不同濃度的電解質(zhì)組成 ，一種為前導(dǎo)電解質(zhì) ， 充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì) ， 置于一端的電泳槽中 。 前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分 ， 后者則低于任何樣品組分 ， 被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間 ， 在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下 ， 各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解 質(zhì)之間的空隙中移動(dòng) ， 實(shí)現(xiàn)分離 。 0606 等速電泳示意圖 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （ 六 ） 雙向凝膠電泳 （ 二維電泳 ） 第一向采用等電聚焦 根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的 PI的不同 ， 將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離 。 第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ SDSPAGE） 就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離 。 其結(jié)果不再是條帶狀 ， 而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀 。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 膠性 PH9 中電 加解 入質(zhì) 了溶 雙液 PH3 加上電場(chǎng)后建立穩(wěn)定PH梯度 蛋白質(zhì)溶液加入，建立電場(chǎng) 染色后，蛋白質(zhì)因 PI值不同，沿 PH梯度分離開 第一向 等電聚焦 PI逐漸降低 等電聚焦膠放在 SDS－聚丙烯酰胺凝膠上 第二向 SDS－聚丙烯酰胺凝膠
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