電泳技術(shù)和常用電泳儀【精品-文庫吧
2025-01-03 19:01 本頁面
【正文】 、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等）生物組分的分離分析。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （ 五 ） 等速電泳 采用兩種不同濃度的電解質(zhì)組成 ，一種為前導(dǎo)電解質(zhì) ， 充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì) ， 置于一端的電泳槽中 。 前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分 ， 后者則低于任何樣品組分 ， 被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間 ， 在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下 ， 各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解 質(zhì)之間的空隙中移動(dòng) ， 實(shí)現(xiàn)分離 。 0606 等速電泳示意圖 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （ 六 ） 雙向凝膠電泳 （ 二維電泳 ） 第一向采用等電聚焦 根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的 PI的不同 ， 將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離 。 第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ SDSPAGE） 就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離 。 其結(jié)果不再是條帶狀 ， 而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀 。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 膠性 PH9 中電 加解 入質(zhì) 了溶 雙液 PH3 加上電場(chǎng)后建立穩(wěn)定PH梯度 蛋白質(zhì)溶液加入，建立電場(chǎng) 染色后，蛋白質(zhì)因 PI值不同，沿 PH梯度分離開 第一向 等電聚焦 PI逐漸降低 等電聚焦膠放在 SDS－聚丙烯酰胺凝膠上 第二向 SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳 分子量逐漸降低 PI 逐漸降低 0607 雙向凝膠電泳示意圖 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 (七 ） 免 (疫 )(役 )電泳 免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種方法的結(jié)合 。 將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳 ，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開 ，然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散 ， 把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇 ， 在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤?， 形成肉眼可見的沉淀弧 。 第三節(jié) 常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo) 一 、 常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu) （ 一 ） 電泳電源 （ 二 ） 電泳槽 （ 三 ） 附加裝置 0608 平臥式電泳槽裝置示意圖 第三節(jié) 常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo) 二 、 電泳儀的主要技術(shù)指標(biāo) 1． 輸出電壓 8． 連續(xù)工作時(shí)間 2． 輸出電流 9． 保護(hù)措施 3． 輸出功率 10． 顯示方式 4． 電壓穩(wěn)定度 11． 定時(shí)方式 5． 電流穩(wěn)定度 12． 電源電壓 6． 功率穩(wěn)定度 13． 電源頻率 7． 輸出組數(shù) 14． 功耗 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 一 、 毛細(xì)管電泳的相關(guān)概念 1. 電場(chǎng)強(qiáng)度 （ Electric Field Strength） 2. 電泳淌度 ( Electrophoretic Mobility) 3. 遷移時(shí)間 （ Migration Time） 4. 電泳速度 ( Electrophoretic Velocity) 5. 電滲流 （ Electroosmotic Flow， EOF） 6. 焦耳熱 （ Joule Heating） 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 二、毛細(xì)管電泳的基本工作原理 溶液中的帶電粒子以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，沿毛細(xì)管通道，以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向遷移，并依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異 而實(shí)現(xiàn)分離。 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 0609 毛細(xì)管電泳儀裝置示意圖 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 三、毛細(xì)管電泳的特點(diǎn) 1. 高靈敏度 2. 高速度 3. 高分辨率 4. 樣品少 5. 自動(dòng)化程度高 6. 應(yīng)用范圍廣 0610 英特雷勃 —— 全自動(dòng)電泳儀 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 四、毛細(xì)管電泳的分離模式 （一）毛細(xì)管區(qū)帶電泳 它是通過在充滿電解質(zhì)溶液的毛細(xì)管中，不同質(zhì)荷比大小的組分在電場(chǎng)的作用下，依遷移速度的不同而進(jìn)行分離的。根據(jù)組分的遷移時(shí)間 進(jìn)行定性，根據(jù)電泳峰 的峰面積或峰高進(jìn)行定 量分析。 0611 毛細(xì)血管區(qū)帶電泳原理圖 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 ? （二）毛細(xì)管凝膠電泳 ? 將板上的凝膠移到毛細(xì)管中作支持物進(jìn)行的電泳。凝膠具有多孔性，起類似分子篩的作用，能根據(jù)待測(cè)組分的質(zhì)荷比和分子體積的不同而進(jìn)行分離。 ? 適用于分離、測(cè)定肽類、蛋白質(zhì)、 DNA類物質(zhì)的分離。 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 （三）毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜 (MECC) 使 MECC系統(tǒng)中存在兩個(gè)相：流動(dòng)的水相和起到固定相作用的膠束相。在含有膠束的流動(dòng)相中，溶質(zhì)在“水相”和“膠束相” (準(zhǔn)固定相 )之間進(jìn)行分配，即使是中性溶質(zhì)，因其本身疏水性不同，在二者之間的分 配也會(huì)有差異，疏水性強(qiáng)的溶質(zhì)在“膠束相”中停留時(shí)間長(zhǎng)，遷移速度就慢。反之，親水性強(qiáng)的溶質(zhì)遷移速度就快，最終中性溶質(zhì)將依其疏水性不同而得以分離。 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 0612毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜原理圖 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 （四）毛細(xì)管等電聚焦電泳 不同等電點(diǎn)的分子分別聚集在不同的位置上，不作遷移而彼此分離，這就是等電聚焦分離過程。毛細(xì)管的等電聚焦是在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)現(xiàn)的等電聚焦過程，具有極高的分辨率，通?？梢苑蛛x等電點(diǎn)差異小于 ，
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