【正文】 酸纖維素薄膜； ④與放射性探針 Southern雜交 ⑤ 放射性自顯影或酶學檢測 分析陽性條帶?？娠@示出不同材料對該探針的限制性片段多態(tài)性情況。 RFLP標記原理 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 （ 1）遍布于整個基因組，數量幾乎是無限的； （ 2）無表型效應，不受發(fā)育階段器官特異性限制； （ 3）共顯性，可區(qū)分純合子和雜合子； （ 4）結果穩(wěn)定、可靠； （ 5） DNA需要量大，檢測技術繁雜， 難以用于大規(guī)模的育種實踐中。 RFLP標記的特點 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 PCR技術的原理 ： 在加熱或堿性條件下可使 DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，形成單鏈 DNA，稱之為變性。 ： 是模板與引物的復性。引物是與模板某區(qū)序列互補的一小段 DNA片段。 ： 從結合在特定DNA模板上的引物為出發(fā)點，將四種脫氧核苷酸以堿基配對形式按 5’→3 ’的方向沿著模板順序合成新的 DNA鏈。 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 二、分子標記的原理和遺傳特性 (二 )RAPD（隨機擴增多態(tài)性 DNA）標記 Williams等于 1990年創(chuàng)立。其基本原理與 PCR技術一致。RAPD標記技術就是用一個（有時用兩個）隨機引物（一般 810個堿基）非定點地擴增基因組 DNA，然后用凝膠電泳分開擴增片段。遺傳材料的基因組 DNA如果在特定引物結合區(qū)域發(fā)生 DNA片段插入、缺失或堿基突變，就有可能導致引物結合位點的分布發(fā)生相應的變化，導致 PCR產物增加、缺少或發(fā)生分子量變化。若 PCR產物增加或缺少，則產生 RAPD標記。 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 primer A B C RAPD標記原理 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 （ 1）不需 DNA探針，設計引物也無須知道序列信息； （ 2）顯性遺傳（極少數共顯性）不能鑒別雜合子和純合子； （ 3）技術簡便，不涉及分子雜交和放射性自顯影等技術； （ 4） DNA樣品需要量少，引物價格便宜，成本較低； （ 5）實驗重復性較差，結果可靠性較低。 RAPD標記的實驗條件摸索和引物的選擇是十分關鍵 而艱巨的工作。只要實驗條件標準化，可以提高 RAPD 標記的再現性。 RAPD標記的特點 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 二、分子標記的原理和遺傳特性 (三 )AFLP（擴增片斷長度多態(tài)性）標記 AFLP即擴增片段長度多態(tài)性，是 1993年由 Marc 和 Pieter 發(fā)明創(chuàng)造的一種 DNA分子標記。該技術是對限制性酶切片段的選擇性擴增，又稱基于 PCR的 RFLP。鑒于 AFLP標記的多態(tài)性強，一次可檢測到 100~150個擴增產物，因而非常適合繪制品種指紋圖譜及進行分類研究。 第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 AFLP標記原理 對基因組 DNA進行雙酶切，在使用的兩種限制性酶中，一種為酶切識別位點為 4堿基的酶，另一種為識別位點為 6堿基的酶。進一步將酶切片段和含有與其粘性末端相同的人工接頭連接，連接后的接頭序列及臨近內切酶識別位點就作為以后 PCR反應的引物結合位點，通過選擇在末端上分別添加1~3個選擇性堿基的不同引物，選擇性地識別具有特異配對順序的酶切片段與之結合，從而實現特異性擴增，最后用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離擴增產物。 G e n o m i c D N A5 ’ A A T T C T 3 ’ 3 ’ G A A T 5 ’L ig a t e adapters + L ig a se5 ’ CT CG T A G A CT G CG T A CC A A T T C T T A CT CA G G A CT CA T 3’ 3’ CA T CT G A CG CA T G G T T A A G A A T G A G T CCT G A G T A G CA G 5’E co RI a d a p t e r M se I adapterA m p lica t io n( + n ) A A T G A G T CCT G A G T A G CA G M s eI p r im e rP r e a m p lif ica t io nE co RI and M se I5 ’ CT CG T A G A CT G CG T A CC A A T T C T T A CT CA G G A CT CA T 3’ 3 ’ CA T CT G A CG CA T G G T T A A G A A T G A G T CCT G A G T A G CA G 5’( + 1 t o + 3 ) A A T G A G T CC T G A G T A G CA GM se I p r im e r5 ’ CT CG T A G A CT G CG T A CC A A T T C T T A CT CA G G A CT CA T 3’ 3 ’ CA T CT G A CG CA T G G T T A A G A A T G A G T CCT G A G T A G CA G 5’ E co RI p r im e r G A CT G CG T A CCA A T T ( + 1 t o + 3 )No se le ct ive b a se s= No P CR p r o d u ct s= la b e l p r im e r E co RI p r im e r G A CT G CG T A CCA A T T ( + n )第一節(jié) 分子標記的類型和作用原理 AFLP標記的特點 （ 1）結合了 PFLP穩(wěn)定性和 PCR技術高效性的特點，不需要事先知道 DNA序列的信息，可以用于任何動植物基因組的研究。 （ 2）多態(tài)性豐富； （ 3）標記多數具有共顯性表達，無復等位效應，表