浙江大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)甲sds—聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量-文庫(kù)吧
2025-01-01 05:47 本頁(yè)面
【正文】 雪茄煙形的長(zhǎng)橢圓棒 。 不同蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物的短軸長(zhǎng)度都一樣 ， 約為 ， 長(zhǎng)軸則隨蛋白質(zhì)分子量成正比變化 。 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 這樣的蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物在凝膠中的遷移率 ， 不再受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響 ， 而只是橢圓棒的長(zhǎng)度 ， 也就是蛋白質(zhì)分子量的函數(shù) 。 ? 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在 15000~202200D之間時(shí) ， 蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率與分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系 ，符合下列方程式： SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? lgMw = b mR + K ? Mw：蛋白質(zhì)的分子量 mR：相對(duì)遷移率 ? b： 斜率 K ：截距 ? 當(dāng)條件一定時(shí) ， b， K 均為常數(shù) ， 即此時(shí) lgMw 與 mR的關(guān)系為線性關(guān)系 ， 如以 lgMw對(duì) mR作圖 ， 應(yīng) 得到一條直線 ， 如右圖： lgMw mR 待測(cè) mR 待測(cè) lgMw SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 如將已知分子量的幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的相對(duì)遷移率對(duì)分子量作圖 ， 可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳 ， 根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得該蛋白質(zhì)的分子量 。 ? 電泳用的支持介質(zhì)為凝膠 ， 常用的有聚丙烯酰胺凝膠 (PAGE)和瓊脂糖凝膠 （ agarose） 。 本試驗(yàn)用聚丙烯酰胺凝膠 。 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 ? 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺 （ 單體 ， Acr） 和甲叉雙丙烯酰胺 （ 雙體 ， Bis） 在催化
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