《綠色銀光蛋白》ppt課件-文庫吧
2024-12-31 08:35 本頁面
【正文】 為 。 GFP結(jié)構(gòu) GFP結(jié)構(gòu) ? GFP結(jié)構(gòu) GFP結(jié)構(gòu) GFP結(jié)構(gòu) GFP晶體結(jié)構(gòu)顯示 , 蛋白質(zhì)中央是一個(gè)圓柱形水桶樣結(jié)構(gòu) , 長 420 nm , 寬 240 nm , 由 11個(gè) β片層組成桶狀構(gòu)成疏水中心和由 4個(gè) α螺旋以及其中一個(gè) α螺旋包含著的發(fā)光基團(tuán)構(gòu)成 。 GFP結(jié)構(gòu) GFP結(jié)構(gòu) ?桶的頂部由 3 個(gè)短的垂直片段覆蓋 , 底部由一個(gè)短的垂直片段覆蓋 , 對熒光活性很重要的生色團(tuán)則位于大空腔內(nèi)。嚴(yán)密的桶形結(jié)構(gòu)保護(hù)著熒光基團(tuán)，防止它被周圍環(huán)境淬滅。實(shí)驗(yàn)表明 GFP 熒光產(chǎn)生的前提是桶狀結(jié)構(gòu)完整性 , 去除 N 端 6 個(gè)氨基酸或 C 端 9 個(gè)氨基酸 ,GFP 均會失去熒光。這是由于生色團(tuán)形成的效率較低 , 而且形成過程受外界環(huán)境影響較大的緣故 GFP結(jié)構(gòu) GFP結(jié)構(gòu) GFP獨(dú)特的結(jié)構(gòu) ? 由 238個(gè)氨基酸組成 ? “像一個(gè)罐頭” ? 每個(gè)單體由 11個(gè)反向平行的 ?sheets圍繞，4個(gè) ?helix組成，其中一個(gè) ?helix位于“罐頭”內(nèi) ? 大約長 420 nm , 寬 240 nm ? 熒光基團(tuán)位于核心的 ?helix GFP結(jié)構(gòu) 由 α螺旋含有發(fā)光基團(tuán)由第 65 、 66 、 67 位絲氨酸、酪氨酸、甘氨酸形成生色團(tuán)構(gòu)成。翻譯出的蛋白質(zhì)折疊環(huán)化之后 , 在 O 2 存在下 , 分子內(nèi)第 67 位甘氨酸的酰胺對第 65 位絲氨酸的羧基的親核攻擊形成第 5 位碳原子咪唑基 , 第 66 位酪氨酸的α2β鍵脫氫反應(yīng)之后 , 導(dǎo)致芳香團(tuán)與咪唑基結(jié)合。這樣 , GFP 分子中形成對羥基苯甲酸咪唑環(huán)酮生色團(tuán) , 該過程可以自動(dòng)催化完成。 ? 1. 兩個(gè)野生型 GFP吸收紫外光和藍(lán)光，發(fā)射綠光，在 395 nm 出現(xiàn)一個(gè)最大吸收峰 , 在 470 nm 出現(xiàn)一個(gè)小的吸收。 出現(xiàn)兩個(gè)吸收峰的原因可能是由于存在陰性和中性兩個(gè)不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的生色團(tuán)。由于存在兩個(gè)吸收峰 , 野生型 GFP 可以被標(biāo)準(zhǔn)的長波紫外 源和異硫氰酸熒光素 (fluorescein isothiocyanate , FITC) 所激發(fā)。 GFP性質(zhì) ? 2. 能夠在單獨(dú)或者與其它蛋白融合時(shí)產(chǎn)生熒光。而其最顯著的特點(diǎn)是除了氧氣之外，不需要其他輔酶，不需底物。 ? 3. Baird等研究
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1