xiap原核重組蛋白的表達(dá)和純化-文庫吧
2024-12-28 09:04 本頁面
【正文】 0%丙烯酰胺、 Tris()、 10%SDS、 10%過硫酸銨 、TEMED 、 1mol/L Tris() 原核載體構(gòu)建（ pET151） 轉(zhuǎn)化 Rossate 小型誘導(dǎo) 在最佳誘導(dǎo)條件下大型誘導(dǎo)（ 200ml） IPTG濃度 誘導(dǎo)溫度 誘導(dǎo)時(shí)間 細(xì)胞破碎 蛋白純化 蛋白純化條件優(yōu)化 SDSPAGE檢測 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖 ? pET151原核載體構(gòu)建 ? 表達(dá)載體轉(zhuǎn)化 （ CaCl2） ? 誘導(dǎo)條件優(yōu)化（ IPTG濃度、時(shí)間、 OD、誘導(dǎo)溫度） ? 蛋白純化條件優(yōu)化 結(jié)果：一、表達(dá)優(yōu)化 OD值的影響 從圖中可以看出，當(dāng) OD為 ，目的蛋白表達(dá)最多。而且隨著 OD值的繼續(xù)增大，蛋白表達(dá)量有下降，但是不明顯。說明在溫度 37℃ ， IPTG濃度 5ug/ml，誘導(dǎo)時(shí)間 4h的情況下，誘導(dǎo)前的 OD值在 ，目的蛋白表達(dá)量都較高。 OD值為 ,IPTG濃度為 IPTG濃度 5ug/ml，誘導(dǎo)時(shí)間 4h的情況下， 30℃ 誘導(dǎo)的結(jié)果明顯好于其他溫度，遺憾的是目的蛋白
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