sl14核酸的生物合成1-dna的復(fù)制-文庫吧
2024-12-24 11:53 本頁面
【正文】 n)向兩個(gè)方向解鏈，形成兩個(gè)延伸方向相反的復(fù)制叉，稱為雙向復(fù)制。 復(fù)制中的放射自顯影圖象 復(fù)制叉的結(jié)構(gòu) 當(dāng) DNA復(fù)制從起始區(qū)起動的時(shí)候，起始區(qū)的DNA雙鏈因發(fā)生解鏈而形成叉狀結(jié)構(gòu)，這樣的結(jié)構(gòu)被稱為復(fù)制叉 （三）、復(fù)制的半不連續(xù)性 3? 5? 3? 5? 解鏈方向 領(lǐng)頭鏈 (leading strand) 隨從鏈 (lagging strand) 岡崎片段 （ Okazaki fragment） 二、參與大腸桿菌 DNA復(fù)制的酶類 復(fù)制過程 參加物質(zhì) 原料： dNTP 條件：供能 ATP Mg2+ 模板： DNA 酶 引物 體內(nèi)： RNA 體外： DNA 單鏈結(jié)合蛋白等 過程： DNA復(fù)制是多種蛋白質(zhì)和酶參與的復(fù)雜過程 。 DNA聚合酶 引物酶 解螺旋酶 連接酶 拓?fù)洚悩?gòu)酶 兩個(gè)特點(diǎn) ： DNA 新鏈生成需 引物 和 模板 ； 新鏈的延長 只可沿 5? → 3?方向進(jìn)行 。 （一） DNA聚合酶（ DNA polymerase） 簡稱： DNApol Ⅰ Ⅱ Ⅲ 種類 ： 原核 α β γ δ ε 真核 DNA聚合酶 (DNApol) 這類酶的共同性質(zhì) : (dNTP)為前體催化合成 DNA。 ， 按堿基互補(bǔ)原則合成子鏈 。 ， 不能起始合成新的 DNA鏈 。催化 dNTP加到生長中的 DNA鏈的 3’ OH末端 。 DNA合成的方向是 5’→ 3’ ； 模板； 引物； dNTP； 合成方向； 反應(yīng)可逆； Mg2+； DNApol 作用：催化兩個(gè) dNTP 生成磷酸二酯鍵 反應(yīng)： 5??3? 的聚合活性 指出： DNApol還具有核酸外切酶活性 5180。 A G C T T C A G G A T A ? 3180。 | | | | | | | | | | | 3180。 T C G A A G T C C T A G C G A C 5180。 ? 3? ? 5?外切酶活性 ? 5? ? 3?外切酶活性 ? 能切除突變的 DNA片段。 能辨認(rèn)錯(cuò)配的堿基對，并將其水解。 ? 核酸外切酶活性 Arthur Kornberg (1958) 大腸桿菌細(xì)胞蛋白質(zhì)提取物 + DNA模板 有無 DNA合成 ?? dNTPs Mg2+ (輔助因子 ) ATP (能源 ) 游離的 3’OH端 (引物 ) 體外測定 DNA復(fù)制 純化得到 DNA聚合酶 I Stanford University Stanford, CA, USA The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1959（揭示人類DNA合成機(jī)制 ） DNA pol Ⅰ ： 作用： 1. 對復(fù)制中的錯(cuò)誤進(jìn)行校讀和切除； 2. 填補(bǔ)復(fù)制和修復(fù)過程中出現(xiàn)的空隙； DNA 大片段：核苷酸聚合 枯草桿菌 Pr酶 （ Mw ） (Klenew Frament) 小片段： 5’ － 3’ 外切 （ Mw ） PolⅠ DNApol Ⅰ （ 109kD） A－ P為 18個(gè) ?－螺旋區(qū)， H和 I之間由較大的非螺旋區(qū)連接。 小片段 大片段 （ Klenow fragment） 5’→3 ’聚合功能， 339。→5 39。外切酶活性 539?！? 39。外切酶活性 DNA pol I J H B DNA pol II ? 1970年分離得到； ? 聚合酶活性： 2400base/min； ? 100分子 /cell； ? 有 3’→ 5’核酸外切酶活性， 沒有 5’→ 3’核酸外切酶活性； ? 在 DNA repair 中起作用； DNA pol III “真正”的大腸桿菌 DNA復(fù)制酶 ? 快： 1 000nt/秒 /酶 ? 酶量合適 ? 精確 其結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜 !!! ? ? DNA 聚合酶 Ⅲ 不對稱二聚體 ? ? ? ? ? ε ? ? ?39。 ?39。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ε ? 十種亞基（ αβγθτδδ’χΨε） 組成的不對稱二聚體。 Αεθ組成 核心酶 ， β2稱為夾子，（ γ2δδ’χΨ）組成 γ復(fù)合物 ，其主要功能是幫助 β亞基夾住 DNA，故稱為夾子裝配器 ，該酶 DNA合成的 持續(xù)能力強(qiáng) ，主要與該結(jié)構(gòu)有關(guān)。 DNApol Ⅲ (250kD) DNA聚合酶 III全酶的滑動鉗夾住雙螺旋 DNA 原核生物的三種 DNA聚合酶性質(zhì)比較表 種 類 PolⅠ Ⅱ
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