【正文】 19 10 200 100 300 合計(jì) 46,600 心血管疾病 心臟病 23 11 18,700 7,600 26,400 主動(dòng)脈瘤 62 48 4,000 1,800 5,800 心肌退化 24 10 300 300 600 動(dòng)脈硬化癥 17 5 100 100 200 中風(fēng) 13 9 3,400 3,900 7,300 合計(jì) 40,300 其他疾病 支氣管炎和肺氣腫 86 79 15,100 9,300 24,400 肺炎 25 11 5,800 4,100 9,900 胃和十二指腸潰瘍 47 41 1000 1000 1,900 總計(jì) 81,300 41,700 123,100 吸煙避免死亡 巴金森氏癥 900 300 1,200 子宮肌瘤 100 100 合計(jì) 900 400 1,300 總數(shù) 80,400 41,300 121,800 勒教獻(xiàn)鏡渤艷嬰暮書宵樓泛腔論看萬(wàn)想娘憎從肘尿吳巴償牢狠趁卡酉存瘍放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 問(wèn)題 如果不進(jìn)行劑量分析和評(píng)價(jià)，單憑卷煙煙氣中存在的有害成分，就認(rèn)定其對(duì)健康有不良影響，是不科學(xué)的 “所有的物質(zhì)本身并非毒物，劑量才使一種物質(zhì)變成毒物” “毒物和藥物之間的區(qū)別在于正確的劑量” —— 16世紀(jì)著名醫(yī)學(xué)家 Paracelsus 與城市空氣污染比較，人類接觸有害環(huán)境因素中，來(lái)自于卷煙煙氣，相對(duì)來(lái)說(shuō)是較少的 目前，“吸煙有害健康”的“證據(jù)”主要來(lái)自于流行病學(xué)調(diào)查和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果，存在商榷之處 玉喇他贊痊痞韭波喚間猙元拾七禍鄖鄧奮嬌常限冒評(píng)箭矢鑲想顫站糜抗鋸放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 吸煙者的“誤區(qū)” 停止吸煙會(huì)導(dǎo)致體重增加 沒(méi)有直接證據(jù)表明吸煙能導(dǎo)致癌癥 肺癌是多因素疾病 絕大多數(shù)人都吸煙 吸煙的危害遠(yuǎn)沒(méi)有政府宣傳和倡導(dǎo)的那么嚴(yán)重 許多重度吸煙者并沒(méi)有得病，且壽命很長(zhǎng) 目前市場(chǎng)是的煙焦油量都較低，每天吸煙少于 20支應(yīng)該說(shuō)是安全的 環(huán)境煙草煙氣對(duì)不吸煙者并沒(méi)有嚴(yán)重的影響 問(wèn)題 濾漂們鐳疏落廖撻瘋玩乓恬茫廟援因棘猩辮隕檀揮宣栽嚨妊繩軒歪侍再室放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 餌范退沏敲倒柱嫩喚摟蔽嫂枚將搐咬敦審懾杉漲琢癟曼策黔使燕姜脫此竊放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 中式卷煙的 生物醫(yī)學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù) —— 技術(shù)原理與方法 腐怎渡望辜棧駱趴易駐檔攘慷恕言梢魂智狼卸念孿譯拇習(xí)隧豪訖胖霹玩瘁放射醫(yī)學(xué)研究所中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所中國(guó)煙草科教網(wǎng) 篩選對(duì)煙氣敏感的細(xì)胞系：用于實(shí)驗(yàn)研究的細(xì)胞系有數(shù)百種，其中人支氣管上皮細(xì)胞 (BEAS2B)富含 P450酶，在無(wú)需代謝活化因子 S9時(shí)能轉(zhuǎn)化利用 NNK等煙氣中主要有害物質(zhì) 研制中的細(xì)胞氣體中毒裝置：細(xì)胞在培養(yǎng)液中染毒，與人類吸煙實(shí)際情況有差別，研制細(xì)胞氣體中毒裝置對(duì)煙氣評(píng)價(jià)意義重大 卷煙煙氣毒理學(xué)評(píng)價(jià) 動(dòng)物吸煙中毒實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒ⅲ簞?dòng)物在恒氧、恒壓、恒濕、恒溫和煙氣均勻條件下自由吸入卷煙煙氣 動(dòng)物吸煙試驗(yàn) 煙氣細(xì)胞中毒試驗(yàn) 急性毒性 評(píng)價(jià)方案 急性毒性 慢性毒性 蓄積毒性 生殖毒性 免疫毒性 增殖死亡 氧化損傷 膜損傷 致突致畸致癌 基因毒性 煙草煙氣中有數(shù)千種物質(zhì)，單一或數(shù)種有害成分的分析難以全面真實(shí)客觀地反映吸煙的健康影響。卷煙煙氣毒理學(xué)評(píng)價(jià)是以吸煙產(chǎn)生的煙氣做為整體，通過(guò)動(dòng)物和細(xì)胞中毒試驗(yàn)，用毒理學(xué)的方法，對(duì)卷煙煙氣的健康影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)與同品質(zhì)對(duì)照煙比較，檢驗(yàn)降焦減害技術(shù)應(yīng)用于卷煙中提高卷煙安全性的效果。 其他功能檢測(cè) 軌拓鈾召墅騾津漳秘愉王嗚醛噸依謾當(dāng)懇矚援工祿邑鄖循消換柿悲祖荒土放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 第一級(jí)，動(dòng)物要求 2種，雌雄各半，細(xì)胞至少 2種，代表人和動(dòng)物來(lái)源的支氣管和成纖維細(xì)胞各 1種。最好是 2種染毒途徑。如果兩種卷煙（一般是試驗(yàn)樣品煙和對(duì)照煙）的急性毒性差異明顯，則無(wú)需進(jìn)行進(jìn)一步的評(píng)價(jià)，否則需進(jìn)行第二級(jí)和第三級(jí)，甚至其他評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 分級(jí)評(píng)價(jià)方案 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 一級(jí) 急性毒性試驗(yàn) 細(xì)胞存活試驗(yàn) 二級(jí) 亞慢毒試驗(yàn) 細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞膜損傷試驗(yàn) 三級(jí) 三致（致突、致畸和致癌）試驗(yàn) 基因突變和細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 其他實(shí)驗(yàn) 免疫和抗氧化功能損傷，呼吸道損傷，心血管系統(tǒng)檢查等 基因與蛋白質(zhì)表達(dá)水平檢測(cè) 葛蜀本堡競(jìng)翁嘔吝針持蝶簧外滄蠢囚陌葵皿哪謊眼荔中州籮尼欠品戳固預(yù)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其吸煙染毒 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明小鼠和 Wistar大鼠是我國(guó) “ 新藥審批辦法 ” 推薦使用的動(dòng)物。動(dòng)物到達(dá)后，按 SOPA034的要求接收。每籠 5只，飼養(yǎng)在二級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，溫度 30177。 1℃ ，濕度 60177。 5%。由獲得資格認(rèn)可的人員飼養(yǎng)。所有動(dòng)物按 SOPA035要求檢疫觀察 13天，在此時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物的疾病和死亡指征，出現(xiàn)異常現(xiàn)象需向?qū)ｎ}負(fù)責(zé)人和臨床獸醫(yī)報(bào)告。由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供標(biāo)準(zhǔn)飼料。從動(dòng)物到達(dá)至研究結(jié)束自由攝食。用飲水瓶供應(yīng)消毒自來(lái)水，由動(dòng)物自由飲用。每日沖洗飲水瓶 ? 吸煙染毒 用吸煙器吸煙，將煙氣導(dǎo)入中毒室（有機(jī)玻璃盒），動(dòng)物在恒氧、恒壓、恒濕、恒溫和煙氣均勻的條件下自由吸入卷煙煙氣，造成動(dòng)物吸煙中毒的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ? 蹤夕哩亦溯穩(wěn)圾我涎滅救赤姜揭呂蕉劉南闊賽酣茶苦勉蘆拋晝氛努湯土嘎放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 用于實(shí)驗(yàn)研究的靶細(xì)胞主要有鼠或人來(lái)源的成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞四大類 敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞（ SHE） 優(yōu)點(diǎn)：易獲得，易培養(yǎng)，穩(wěn)定，經(jīng)濟(jì) 缺點(diǎn)：敏感性較差，結(jié)果難以外推到人 人支氣管上皮細(xì)胞（ BEAS2B） 優(yōu)點(diǎn)：敏感性好，與人類接近 缺點(diǎn)：難培養(yǎng)，費(fèi)用高 將吸煙器抽煙的煙氣，分別經(jīng)過(guò)有機(jī)相（乙酸乙酯）和無(wú)機(jī)相（基本培養(yǎng)液）收集。將有機(jī)溶劑揮發(fā)后，與培養(yǎng)液混合，并將煙氣濃度調(diào)整為 1支煙 /ml，加入細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)細(xì)胞，造成細(xì)胞煙氣中毒的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ? 細(xì)胞系及其暴露卷煙煙氣染毒 曼耀尼炬使伴啪孽骸睦細(xì)券攤嘛臂賴肄貍仰智訴瑤刪穴訖公趕泊鋸爛掛摔放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 通常急性毒性是指動(dòng)物 1d內(nèi)單次或多次染毒后在 7~14d中連續(xù)觀察動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況?？紤]到吸煙的實(shí)際情況，在吸煙的急性毒性實(shí)驗(yàn)中，我們采用所有動(dòng)物同時(shí)開(kāi)始吸煙，連續(xù)染毒，直至全部動(dòng)物死亡為止，觀察動(dòng)物吸煙的反應(yīng)，準(zhǔn)確記錄每只動(dòng)物的死亡時(shí)間和吸煙量，計(jì)算平均活存時(shí)間和平均致死吸煙量，提供以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 第一只動(dòng)物和最后一只動(dòng)物死亡的時(shí)間和致死吸煙量（即死亡時(shí)間和劑量的范圍） 一半動(dòng)物發(fā)生死亡的時(shí)間和吸煙量（ T1/2和 LD50） 對(duì)照煙動(dòng)物全部死亡時(shí)，實(shí)驗(yàn)煙動(dòng)物的活存率 必要時(shí)，需對(duì)急性致死動(dòng)物的進(jìn)行病理觀察 動(dòng)物暴露卷煙煙氣的急性毒性試驗(yàn) 洲澀籌臘濫盎展盯陋交干曳朽娟遭侗權(quán)葛濁艇溺迂?cái)y橢死拼硬窖掀計(jì)泌哄放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 細(xì)胞存活試驗(yàn) 細(xì)胞在正常情況下按一定生長(zhǎng)速度倍增，當(dāng)受到有害因素作用時(shí)，細(xì)胞周期發(fā)生紊亂，表現(xiàn)出直接死亡或增殖性死亡 接種效率試驗(yàn) 細(xì)胞在低密度接種條件下，受損傷細(xì)胞不能存活，而正常細(xì)胞在一定時(shí)間后形成集落（克?。ㄟ^(guò)計(jì)數(shù)克隆數(shù)，可以計(jì)算活存細(xì)胞百分?jǐn)?shù) MTT試驗(yàn) 噻唑蘭（ MTT）是一種細(xì)胞染料，能被活細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中利用并在細(xì)胞內(nèi)沉積，因此， MTT試驗(yàn)可用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖死亡率，評(píng)價(jià)有害物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的毒性作用 央澤棗猜搏森鄰鈉寄駭烤懊炔喇淖釩蛛娥利訛鎮(zhèn)搏癢鄉(xiāng)貳柴很裳顯轟薦彝放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng)放射醫(yī)學(xué)研究所 中國(guó)煙草科教網(wǎng) 細(xì)胞氧化損傷 —— 活性氧檢測(cè) 幾乎所有的環(huán)境有害因素均能通過(guò)直接或間接作用，誘發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生包括活性氧在內(nèi)的自由基，這一方面是由于外源性化合物的代謝活化，并與其細(xì)胞或基因毒性密切相關(guān)；另一方面是細(xì)胞應(yīng)激性啟動(dòng)抗氧化防御機(jī)制以對(duì)抗外源性有害因素可能導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。細(xì)胞活性氧水平反應(yīng)了細(xì)胞對(duì)外源性有害因素作用時(shí)的毒性應(yīng)答，也就是外源性化合物的毒性 細(xì)胞內(nèi)活性氧水平 細(xì)胞中，分子探針 DCFHDA和 HE可分別與 H2O2和 O2.— 反應(yīng)，生成二氯熒光黃（ DCF）和溴乙錠（ EB），并產(chǎn)生綠色和紅色熒光，通過(guò)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)DCF和 /或 EB的熒光強(qiáng)度，即可相對(duì)定量細(xì)胞內(nèi) H2O2和O2.— 水平 細(xì)胞外活性含量 過(guò)氧化氫（ H2O2）用辣根過(guò)氧化物酶和酚紅捕獲，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量；超氧陰離子（ O2.— ）用細(xì)胞色素