《酶的分離和純化》ppt課件-文庫(kù)吧
2024-12-21 20:18 本頁(yè)面
【正文】 1） 分配層析 ：物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)不同 a） 紙層 b） 薄層 (比紙層靈敏 100倍但剝板困難 ) c） 柱層 2） 吸附層析 （ absorption chromatography） ：吸附劑對(duì)通過(guò)它的物質(zhì)吸附力不同 ， 吸附力包括離子引力 、 疏水作用 、 范德華力和氫鍵 a） 薄層 b） 柱層 ? 填料一般為硅膠 、 氧化鋁 、 磷酸鈣 、 活性白土和羥基磷灰石；常用羥基磷灰石 。帶正電 , 穩(wěn)定范圍 10, 吸附量 1mg/g濕劑 紙層 薄層 3） 離子交換層析 （ ion exchange chromatography） ：交換劑上帶電荷 ， 可根據(jù)樣品的電荷予以分離 ? a） 陽(yáng)離子交換層析 b） 陰離子交換層析 ? c） 離子交換劑的類(lèi)型：離子交換樹(shù)脂 、 離子交換纖維素 、 離子交換凝膠 ? d） 實(shí)驗(yàn)室常用的離子交換劑：陰離子交換劑 DEAECellulose、 DEAESephadex；陽(yáng)離子交換劑 CM Cellulose、 CM Sephadex ? e） 離子交換劑的預(yù)處理：去雜質(zhì)；溶脹；除小顆粒；改型 ? 陽(yáng)離子交換劑： 堿 → 水 → 酸 → 水 → 平衡 ? 陰離子交換劑： 酸 → 水 → 堿 → 水 → 平衡 ? f） 柱層析：床體積等于 25倍束縛樣品需要量； 徑 ∶ 高 = 1∶ 15 ； 上樣量不超過(guò)柱體積的 10%（ *注意上樣方法 ） ；洗脫方法有兩種 ——不連續(xù)梯度洗脫和連續(xù)梯度洗脫；分布收集器收集每管 23ml ? g） 交換劑后處理：飽和 NaCl→ 水 → 酸或堿 → 水 → 平衡 連續(xù)梯度洗脫 ? 梯度混合器 離子交換層析 ? 陽(yáng)離子交換劑 ? 陰離子交換劑 Anion exchange chromatography 4） 凝膠層析（分子篩層析）（ gel filtration chromatography） ：根據(jù)分子量大小予以分離 ? a） 凝膠預(yù)處理：凝膠 → 浸入洗脫液 → 輕輕攪拌 ? ↓ ? 加熱 90100℃ （ 水浴加熱 ） ? b） 層析柱準(zhǔn)備： 100柱； 稠膠灌柱； 23個(gè)床體積的緩沖液平衡； 流速 1618ml/h ? c） 層析：蘭葡聚糖 （ 分子量 2 106） 驗(yàn)柱并求外水體積 （ V0） ；上樣量 15% ； ? 恒壓洗脫； 流速 1618ml/h ? d） 凝膠后處理：
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